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Roche

FastStart SYBR Green Master

sufficient for 500 reactions, sufficient for 5000 reactions, suitable for qPCR, suitable for RT-qPCR

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About This Item

Código UNSPSC:
41106300
NACRES:
NA.55

uso

sufficient for 500 reactions
sufficient for 5000 reactions

Nível de qualidade

Características

dNTPs included: no
hotstart

fabricante/nome comercial

Roche

embalagem

pkg of 500 x 20 μL reactions (04673484001)
pkg of 5000 x 20 μL reactions (04673492001)

técnica(s)

RT-qPCR: suitable
qPCR: suitable

entrada

purified DNA

método de detecção

probe-based

Descrição geral

FastStart SYBR Green Master; Instruções de uso

A FastStart SYBR® Green Master é uma mistura de reação hot start pronta para uso sem ROX para reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) e transcrição reversa (RT)-qPCR em sistemas de PCR em tempo real, exceto instrumentos LightCycler®. Esta mistura-mestre simplifica o preparo de reações para detecção e análise de DNA. Em combinação com um instrumento de PCR em tempo real, primers de PCR adequados e uma sonda de hidrólise, a FastStart TaqMan® Probe Master permite a detecção muito sensível e quantificação de sequências de DNA definidas.
O SYBR® Green I é um corante específico para DNA dupla-fita. Durante cada fase da síntese de DNA, o corante SYBR® Green I, que é incluído na mistura de reação, se liga aos produtos de PCR amplificados. O amplicon pode ser detectado por sua fluorescência.
Demonstrou-se que os protocolos hot start melhoram significativamente a especificidade, a sensibilidade e o rendimento da PCR. Grupos bloqueadores termoinstáveis em alguns resíduos de aminoácidos da Taq DNA polimerase FastStart tornam a enzima modificada inativa em temperatura ambiente. Portanto, não há alongamento durante o período quando os primers podem se ligar de maneira inespecífica. A Taq DNA polimerase FastStart é ativada por meio da remoção dos grupos bloqueadores em uma temperatura alta (ou seja, uma etapa de pré-incubação a +95 °C).
A FastStart Universal SYBR® Green Master (Rox) pode ser usada para amplificação e detecção de qualquer alvo de DNA ou cDNA, inclusive aqueles com alto teor de GC ou AT. No entanto, para cada alvo, é necessário adaptar seu protocolo de detecção às condições de reação do seu instrumento de PCR em tempo real específico e desenvolver primers de PCR específicos para cada alvo.
Combine esta mistura-mestre com o kit de síntese de cDNA Transcriptor First Strand para obter excelentes resultados em qRT-PCR em duas etapas.

Aplicação

A FastStart SYBR® Green Master foi usada em qPCR e qRT-PC em duas etapas no formato de detecção de SYBR® Green I. Ela também pode ser usada:
  • em reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) para quantificação do título de vírus adenoassociado (AAV)
  • em qPCR para determinar o nível de expressão de diferentes genes Col6a1-3 em relação à gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH)
  • em reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) de mRNA do receptor 1 de estrogênio acoplado à proteína G (GPER)
  • em qRT-PCR para estudos de expressão gênica

Use a FastStart SYBR® Green Master com qualquer instrumento de qPCR em tempo real, exceto os instrumentos LightCycler®.

Características e benefícios

  • Melhore a especificidade e a sensibilidade da PCR:
Conte com a Taq DNA polimerase FastStart desta mistura para minimizar a formação de produtos de amplificação inespecíficos pela PCR hot start.
  • Evite a superestimação de resultados de qPCR:
Elimine produtos de amplificação não específicos e dímeros de primers que aumentam a quantidade de SYBR Green I ligado quantificado.
  • Amplifique e detecte uma ampla gama de alvos de DNA e cDNA:
Amplifique fragmentos com até 500 pb de comprimento, inclusive aqueles com alto teor de GC ou AT. Funciona com qualquer instrumento de PCR em tempo real, exceto os instrumentos LightCycler®.
  • Use qualquer instrumento de PCR em tempo real, exceto os instrumentos LightCycler®:
Escolha dentre duas formulações - uma que contém o corante de referência ROX e outra sem ROX.
  • Economize tempo e esforço no preparo de qPCR:
Conte com esta mistura-mestre 2x fácil de usar para eliminar a necessidade de misturar componentes, titular MgCl2 ou realizar outras etapas de otimização dispendiosas.
  • Evite falsos positivos resultantes de contaminação por transferência:
A mistura contém dUTP, de modo que ela pode ser usada com Uracil-DNA glicosilase para eliminar o DNA contaminante transferido de reações de PCR anteriores.

Componentes

Mistura-mestre 2x concentrada FastStart SYBR Green Master, que contém a Taq DNA polimerase FastStart, tampão de reação, nucleotídeos (dATP, dCTP, dGTP, dUTP) e SYBR Green I.

Qualidade

Teste de função: Todos os lotes são testados quanto ao seu desempenho em qPCR usando três moldes: um com alto teor de GC, um com alto teor de AT e um molde longo (cerca de 440 pb).

Outras notas

Alvos de qPCR
Em princípio, a FastStart SYBR Green Master pode ser usada para amplificação e detecção de qualquer alvo de DNA ou cDNA, inclusive aqueles com alto teor de GC ou AT. No entanto, para cada alvo, você precisa:

  • adaptar seu protocolo de detecção às condições de reação do seu instrumento de PCR em tempo real e
  • desenvolver primers de PCR específicos para o alvo.

Vide recomendações gerais no manual do operador do seu instrumento de PCR em tempo real.
Duas formas disponíveis
A mistura-mestre está disponível em duas formas – uma que contém o corante de referência ROX e outra sem ROX.
Prevenção da contaminação por transferência
Esta mistura-mestre contém dUTP, que será incorporado nos produtos de PCR para ajudar a evitar falsos positivos resultantes de contaminação por transferência. Em PCRs subsequentes, você pode adicionar uracil-DNA glicosilase para degradar quaisquer contaminantes por transferência contendo uracila (produtos de amplificação de PCRs anteriores).
qRT-PCR
Combine esta mistura-mestre com o nosso kit de síntese de cDNA Transcriptor First Strand para qRT-PCR em duas etapas. Este kit fornece excelentes resultados e funciona de forma eficiente com todos os instrumentos de PCR em tempo real.
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.

Informações legais

FastStart is a trademark of Roche
LightCycler is a registered trademark of Roche
SYBR is a registered trademark of Life Technologies
TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

Código de classe de armazenamento

12 - Non Combustible Liquids

Classe de risco de água (WGK)

WGK 1

Ponto de fulgor (°F)

does not flash

Ponto de fulgor (°C)

does not flash


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