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Merck

Purification FLAG®

Les étiquettes FLAG® permettent une détection plus performante et une purification robuste des protéines de fusion recombinantes. Leur utilité a été démontrée dans de nombreuses applications en aval, des tests de capture aux analyses structurales en passant par les dosages d'activité. L'épitope marqueur FLAG® est un peptide de huit acides aminés court et hydrophile (étiquette DYKDDDDK) qui est facilement clivable par l'entérokinase (EK). En raison de sa petite taille et de son caractère hydrophile, l'étiquette FLAG® se trouve généralement à la surface de la protéine de fusion, ce qui limite ses effets sur la fonction, la sécrétion ou le transport de la protéine de fusion. Quelle que soit votre application finale, nous avons les outils qu'il vous faut pour exprimer, purifier et détecter les protéines de fusion FLAG®.

Expression de protéines à étiquette FLAG®

Purification de protéines à étiquette FLAG®

Détection de protéines à étiquette FLAG®

Notre gamme de produits d'expression de protéines marquées par une étiquette FLAG® comprend des vecteurs pour l'expression efficace de protéines de fusion recombinantes en bactéries et en cellules de mammifères. La technologie SnapFast™ vous permet de déplacer facilement le gène d'intérêt d'un vecteur à un autre pour un clonage plus efficace et plus économique.

  • Le peptide FLAG® standard (séquence : DYKDDDDK) est une petite étiquette qui peut être incorporée avec un risque minime d'encombrement stérique ou d'impact négatif sur la solubilité de la protéine.
  • La séquence de l'étiquette 3xFLAG® fusionne trois épitopes FLAG® en tandem pour une détection encore plus performante (jusqu'à 200 fois plus performante) des protéines de fusion.

Nous proposons une diversité de gels d'agarose pour purification par affinité, de billes magnétiques, de kits de purification et de plaques revêtues pour l'isolement et la purification des protéines marquées par une étiquette FLAG®.

  • Les gels d'agarose pour affinité permettent de purifier les protéines contenant un marqueur de fusion grâce à des anticorps anti-FLAG® greffés sur de l'agarose en billes. Adaptées à la purification à petite ou grande échelle, ces résines conviennent à la purification sur colonne gravitaire.
  • Les billes magnétiques anti-FLAG® M2 sont utilisées pour purifier les protéines recombinantes à marqueur de fusion, une plateforme ou un rack magnétique étant utilisé pour séparer les billes et isoler les protéines pour un traitement rapide.
  • Les plaques de 96 puits revêtues d'anticorps anti-FLAG® M2 ultrasensibles conviennent au criblage par expression, à l'étude des interactions entres protéines ainsi qu'aux les tests ELISA.

Les étiquettes FLAG® et 3xFLAG™ comportent des sites de liaison à des anticorps monoclonaux anti-FLAG® hautement spécifiques, ainsi qu'à des anticorps polyclonaux et des conjugués pour les tests ELISA, les applications de transfert sur membrane (blotting), l'immunofluorescence, l'immunocytochimie, l'immunohistochimie et la cytométrie en flux.

  • L'anticorps anti-FLAG® M2 fixe les protéines de fusion à étiquette FLAG® N-terminale, à étiquette FLAG® C-terminale et à étiquette Met-FLAG®.
  • La liaison de l'anticorps anti-FLAG® M1 est calcium-dépendante et spécifique de l'extrémité N-terminale de l'étiquette FLAG®.
  • L'anticorps anti-FLAG® M5 fixe les protéines de fusion à étiquette FLAG® N-terminale et Met-FLAG®.

Vous hésitez encore sur l'anticorps anti-FLAG® que vous devez choisir ? Consultez notre guide de sélection d'anticorps anti-FLAG® et les caractéristiques de liaison des anticorps anti-FLAG® pour obtenir des informations complémentaires.



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Guide de sélection d'anticorps anti-FLAG®

Anticorps monoclonal anti-FLAG® M1
produit chez la souris
Anticorps monoclonal anti-FLAG® M2
produit chez la souris
Anticorps monoclonal anti-FLAG® M5
produit chez la souris
RéférenceF3040F1804F3165F4042
CloneM1M2M2M5
Séquence immunogèneDYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDK
Méthode de purification des anticorpsPurification sur protéine A-Sepharose™Purification sur matrice exclusive peptide FLAG®-agarosePurification sur protéine A-Sepharose™Purification sur protéine A-Sepharose™
KD53,4 nM9,3 nM9,3 nMNon disponible
SpécificitéHaute spécificité. Reconnaissance de l'épitope FLAG® uniquement lorsqu'il se trouve sur l'extrémité N-terminale libre.Reconnaissance de la séquence FLAG® située sur l'extrémité N-terminale, l'extrémité Met-N-terminale, l'extrémité C-terminale ou n'importe quel site interne de la protéine de fusion à étiquette FLAG®.Forte reconnaissance de la protéine de fusion à étiquette FLAG® Met-N-terminale. Faible liaison à la protéine de fusion à étiquette N ou C-terminale.
SensibilitéDétection de 1 ng de protéine de fusion FLAG-BAP™ sur un dot blotDétection de 2 ng de protéine sur un dot blotDétection de moins de 1 ng de protéine de fusion Met-FLAG® sur un dot blot
Recommandé pour :La détection des protéines de fusion FLAG® dans les systèmes d'expression en cellules de mammifères, en cellules végétales et en bactéries. Très utile pour la purification par affinité. Non recommandé pour la détection des protéines exprimées dans le cytoplasme.La détection par western blotting des protéines cibles exprimées dans un lysat brut de cellules d'E. coli, de plantes ou de mammifères.La détection par western blotting des protéines cibles exprimées dans un lysat de cellules de mammifères et de drosophile. Particulièrement utile pour la détection des protéines de fusion à étiquette Met-FLAG exprimées dans le cytoplasme. Non recommandé pour la détection des protéines de fusion exprimées chez E. coli.
Applications*IP, IC, WB, EIAIP, IC, WB, EIAIP, IC, WB, EIAWB
Exigences particulièresLa liaison nécessite du calcium (le complexe se dissocie en l'absence d'ions calcium).

* IP = immunoprécipitation ; IC = immunochimie, WB = western blotting ; EIA = Enzyme Immunoassay (dosage immunoenzymatique)

Caractéristiques de liaison des anticorps anti-FLAG®

Anticorps et caractéristiques de liaison

Anticorps anti-FLAG M1

IgG2b monoclonales de souris

Anticorps anti-FLAG M2

IgG1 monoclonales de souris

Anticorps anti-FLAG M5

IgG1 monoclonales de souris

Protéine de fusion à étiquette FLAG N-terminale intacte :
Peptide signal – Étiquette FLAG – Protéine
-+Non déterminé
Protéine de fusion à étiquette FLAG Met-N-terminale :
Met – Étiquette FLAG – Protéine
-+++
Protéine de fusion à étiquette FLAG N-terminale :
Étiquette FLAG – Protéine
++Faible
Peptide FLAG interne :
Protéine – Peptide FLAG – Protéine
-+Non déterminé
Protéine de fusion à étiquette FLAG C-terminale :
Protéine – Étiquette FLAG
-+Faible
Liaison calcium-dépendante
(dissociation du complexe dans un tampon contenant de l'EDTA)
+--


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