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Merck

TRANSRTRO

Roche

Transcriptor Reverse Transcriptase

Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise


About This Item

UNSPSC-Code:
41106313
NACRES:
NA.21

Rekombinant

expressed in E. coli

Qualitätsniveau

Assay

≥90% (SDS-PAGE)

Form

liquid

Verwendung

sufficient for 25 reactions
sufficient for 50 reactions
sufficient for 500 reactions

Spezifische Aktivität

0.05 U/mg

Leistungsmerkmale

dNTPs included: no
hotstart: no

Hersteller/Markenname

Roche

Verpackung

pkg of 200 reactions (03531287001)
pkg of 25 reactions (03531317001)
pkg of 50 reactions (03531295001)

Methode(n)

RT-PCR: suitable
RT-qPCR: suitable

Farbe

colorless

pH-Wert

7.2

Löslichkeit

water: miscible

Eignung

suitable for molecular biology

UniProt-Hinterlegungsnummer

Anwendung(en)

genomic analysis
life science and biopharma

Nachweisverfahren

probe-based

Fremdaktivität

DNase activity, none detected
Nicking activity, none detected
RNase activity, none detected

Lagertemp.

−20°C (−15°C to −25°C)

Allgemeine Beschreibung

Eine rekombinante reverse Transkriptase zur robusten Transkription von RNA-Fragmenten bis zu 14 kb unter Verwendung einer zweistufigen RT-PCR mit Thermocyclern und Echtzeit-PCR-Instrumenten.
In Retroviren wie dem humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 (HIV-1) ist die reverse Transkriptase (RT) das Kernenzym. HIV-1 RT besteht aus zwei Untereinheiten von 66 kDa und 51 kDa (p66 und p51). Ein humaner endogener Retrovirus der HERV-K-Familie kodiert für das Enzym der reversen Transkriptase (RT-Enzym).

Anwendung

Die Transkriptor Reverse Transkriptase ist für die Transkription von RNA (mRNA, Gesamt-RNA, viraler RNA und in-vitro-transkribierter RNA) aus einer Vielzahl von Quellen unter Verwendung herkömmlicher Thermocycler und Real-Time-PCR-Instrumente (z. B. der LightCycler® Instrumente) für die folgenden Anwendungen konzipiert:

  • Synthese von Erststrang-cDNA zur Verwendung in nachfolgenden Amplifikationsreaktionen
  • RT-PCR von GC-reichen RNA-Templates
  • Cy3-, Cy5-, DIG-, Biotin- und Aminoallyl-Markierung während der cDNA-Synthese
  • Auffindung und Klonierung von 5′- und 3′-Ende der mRNA durch RACE
  • Erstellung von cDNA-Bibliotheken mit großen Einfügungen
  • Dideoxy-DNA-Sequenzierung
  • RNA-Sequenzierung
  • Markierung am 3′-Ende von DNA-Fragmenten
  • Erstellung von Einzelstrangsonden für genomische Spuren
  • Bei der reversen Transkription von RNA aus humanem Papillomavirus E6, kortikalem und striatalem Gewebe, Muskelbiopsien von Becker-Muskeldystrophie-Proben und miRNA-Stammzellen aus Eizellen und humanen zerebralen mikrovaskulären Endothelzellen (hCMVECs)

Biochem./physiol. Wirkung

Die humane Immundefizienz-Virus Typ 1 reverse Transkriptase (HIV-1 RT) ist grundlegend für die katalytische Umwandlung der einzelsträngigen viralen RNA in die doppelsträngige lineare DNA, die in den Wirtszellchromosomen integriert ist.

Leistungsmerkmale und Vorteile

  • Hohe Empfindlichkeit in zweistufiger RT-PCR.
Transcriptor Reverse Transcriptase wird in konventionellen Thermocyclern und Echtzeit-PCR-Instrumenten (z. B. in LightCycler®-Instrumenten) verwendet.
  • Häufigere vollständige („full-length“) Transkriptionen mit bis zu 14 kb.
Es können cDNA-Bibliotheken mit großen Einfügungen erstellt werden.
  • Schwierige Templates revers transkribieren.
Das Enzym funktioniert gut bei höheren Temperaturen, wodurch die RNA-Sekundärstruktur überwunden wird (z. B. GC-reiche RNA-Templates) und optimale Reaktionsbedingungen ermöglicht werden.
  • cDNA wirksam markieren.
Cy3-, Cy5-, DIG-, Biotin- oder Aminoallyl-markierte Nukleotide werden bei der cDNA-Synthese eingebaut.

Komponenten

  • Transcriptor Reverse Transcriptase, in Lagerpuffer
  • Transcriptor-RT-Puffer, 5x konzentriert

Qualität

Jede Charge der Transcriptor Reverse Transcriptase wird in der RT-PCR routinemäßig auf ihre Funktion getestet:

  • mit einem konventionellen Thermocycler zur Detektion eines 10 kb-Fragments des menschlichen Dystrophin-Gens, ausgehend von der Gesamt-RNA des menschlichen Skelettmuskels
  • mit dem LightCycler®-Instrument zur Detektion von 5 x 102 bis 5 x 106 Kopien von in-vitro-transkribierter menschlicher PBGD RNA. Die Ergebnisse werden in festen Kreuzungspunkten und fester Fluoreszenzintensität festgelegt.

Angaben zur Herstellung

Volumenaktivität: 20 U/μl
Transkription langer, seltener oder schwieriger RNA-Ziele
Transcriptor Reverse Transcriptase wird für die RT-PCR folgender Ziele empfohlen:

  • lange Ziele, da sie bis zu 14 kb RNA-Templates transkribieren kann
  • seltene Ziele, da sie eine hohe Empfindlichkeit besitzt
  • GC-reiche Ziele, da sie bei hohen Temperaturen (bis zu +65oC) funktioniert, um Probleme aufgrund einer extensiven Sekundärstruktur zu beseitigen

Markierung für viele Anwendungen
Transcriptor Reverse Transcriptase wird auch für die Herstellung markierter cDNA empfohlen, da sie eine Vielzahl modifizierter Nukleotide (einschließlich Cy3-, Cy5-, DIG-, Biotin- oder Aminoallyl-markierter dNTPs) übernimmt.
Reaktionsanforderungen
Transcriptor übernimmt ssRNA- und ssDNA-Templates und benötigt einen Primer zur Transkription.

Lagerung und Haltbarkeit

Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

LightCycler is a registered trademark of Roche

Lagerklassenschlüssel

12 - Non Combustible Liquids

WGK

WGK 1

Flammpunkt (°F)

does not flash

Flammpunkt (°C)

does not flash


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Crystal structure of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase complexed with double-stranded DNA at 3.0 A resolution shows bent DNA.
Jacobo-Molina A, et al.
Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 90(13), 6320-6324 (1993)
Identification of an active reverse transcriptase enzyme encoded by a human endogenous HERV-K retrovirus.
Berkhout B, et al.
Journal of Virology, 73(3), 2365-2375 (1999)
Tracking disease progression non-invasively in Duchenne and Becker muscular dystrophies
Spitali P, et al.
Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle, 9, 715-726 (2018)
Fernando E Padovan-Neto et al.
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