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5′/3′ RACE-Kit, 2. Generation

sufficient for 10 reactions

• UNSPSC-Code: 41106313

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 10 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Hersteller/Markenname: Roche
• Versandbedingung: dry ice
• Lagertemp.: −20°C (−15°C to −25°C)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die schnelle Amplifikation von cDNA-Enden (RACE) ist eine verbreitete Technik, die zur schnellen Gewinnung von vollständiger cDNA aus teilweise bekannten Sequenzen verwendet wird. Das 5′/3′-RACE-Kit enthält Transcriptor Reverse Transcriptase und rekombinante Terminale Transferase. Transcriptor Reverse Transcriptase transkribiert vollständige cDNA für die hochsensible und schnelle Amplifikation von 5′- oder 3′-cDNA-Fragmenten bis zu 14 kb. Aufgrund ihrer Thermostabilität (bis zu +65 °C) ist sie in Verbindung mit GC-reichen Templates mit hoher Sekundärstruktur einsetzbar. Durch Verwendung von Transcriptor Reverse Transcriptase kann eine hohe Sensibilität erreicht werden, die zu hoch effizienter cDNA-Synthese und zur Erzeugung langer RACE-Produkte führt. Mithilfe von rekombinanter terminaler Transferase wird an das 3′-Ende der cDNA ein homopolymerer A-Tail angehängt. Der Poly(A)⁺-Tail vermindert die Wahrscheinlichkeit einer unangemessenen Trunkation durch den Oligo(dT)-Anker-Primer und gleicht die im Vergleich zur G/C-Hybridisierung schwächere A/T-Hybridisierung aus. Zudem sind längere Abschnitte von A-Resten erforderlich, damit der Oligo(dT)-Anker-Primer an einer internen Position hybridisieren und das Amplifikationsprodukt trunkieren kann. Tailed-cDNA wird unter Verwendung eines genspezifischen Primers und des Oligo(dT)-Anker-Primers mittels PCR amplifiziert. Die gewonnene cDNA wird weiter durch eine zweite PCR amplifiziert, bei der ein spezifischer Nested-Primer und der PCR-Anker-Primer eingesetzt werden. So können die RACE-Produkte für nachfolgende Studien in einen geeigneten Vektor geklont werden.

Spezifität

Hitzeinaktivierung: Terminale Transferase: 70 °C für 10 Minuten
Transcriptor Reverse Transcriptase: 85 °C für 5 Minuten

Anwendung

5′/3′ RACE Kit, 2. Generation ist geeignet für

• Struktur- und Expressionsstudien von RNA-Molekülen
• Herstellung von vollständiger („full-length“) cDNA
• Isolierung und Charakterisierung von 5′- oder 3′-Enden aus RNA-Botschaften mit niedriger Kopienzahl
• Erststrang-cDNA-Synthese
• Amplifikation und weitere Klonierung seltener mRNAs
• In Verbindung mit Exon-Trapping-Methoden verwenden
• Produkte der RACE-Reaktion können ohne Klonierung direkt sequenziert werden

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Robuste Leistung: Rekombinante Transcriptor Reverse Transcriptase ermöglicht Prozession durch Regionen mit schwieriger sekundärer RNA-Struktur.
• Praktisch: Funktions- und Expressionsstudien des 5′ oder 3′-Endes der RNA können mit dem gleichen Kit durchgeführt werden.
• Zuverlässig: dA-Tailing von cDNA mit rekombinanter terminaler Transferase vermindert die Wahrscheinlichkeit unangemessener Verkürzung (Trunkation).
• Reproduzierbar: Oligo-dT-Anker-Primer mit Nicht-3′dT gewährleistet die korrekte Bindung an das innere Ende des Poly(A)-Tail.
• Herstellung langer Fragmente: Erzeugen Sie cDNA mit einer Länge von bis zu 14 kb mit Transcriptor Reverse Transcriptase.

Die Kontrollreaktion schließt die Transkription der Kontroll-RNA in Erststrang-cDNA mit dem Kontrollprimer neo1/rev ein. Die Amplifikation der cDNA wird mit dem Kontrollprimer neo2/rev und neo3/for durchgeführt, um ein 157-bp-PCR-Produkt zu erhalten. Das Tailing der aufgereinigten cDNA erfolgt mit dATP. Die Amplifikation der Tailed-cDNA erfolgt mit Oligo-dT-Anker-Primer und dem Kontrollprimer neo2/rev, um ein 293-bp-PCR-Produkt zu erhalten.

Verpackung

1 Kit mit 12 Komponenten

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Nur Kit-Komponenten

• cDNA Synthesis Buffer 5x concentrated
• Transcriptor Reverse Transcriptase 20 U/μl
• Deoxynucleotide Mix
• dATP, pH 7.5 (20 °C)
• Reaction Buffer 10x concentrated
• Terminal Transferase, recombinant
• Control neo-RNA 1 ng/μl
Oligo dT-Anchor Primer
PCR Anchor Primer
Control Primer neo1/rev primer 12.5 μM
Control Primer neo2/rev primer 12.5 μM
Control Primer neo3/for primer 12.5 μM

Alle anzeigen (12)

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash