MAB1012
Anti-Alkalische-Phosphatase-Antikörper, E. coli, nur bakteriell
ascites fluid, Chemicon®
Synonym(e):
AP, Alk. Phos.
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About This Item
UNSPSC-Code:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
Empfohlene Produkte
Biologische Quelle
mouse
Qualitätsniveau
Antikörperform
ascites fluid
Antikörper-Produkttyp
primary antibodies
Klon
monoclonal
Speziesreaktivität
E. coli
Hersteller/Markenname
Chemicon®
Methode(n)
immunocytochemistry: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable
western blot: suitable
Isotyp
IgG2a
UniProt-Hinterlegungsnummer
Versandbedingung
dry ice
Posttranslationale Modifikation Target
unmodified
Angaben zum Gen
Escherichia coli ... PhoA(945041)
Spezifität
Alkalische Phosphatase (AP). MAB1012 hat eine hohe Affinität und erkennt mittels SDS-PAGE eine AP-Determinante, die gegen Denaturierung resistent ist. Er eignet sich daher ideal für den empfindlichen und spezifischen Nachweis von AP-Fusionsproteinen durch Western-Blot-Analysen von E.-coli-Transformanten, die Fusionsprodukte exprimieren.
Immunogen
Epitop: E. coli, nur bakteriell
F201C1B
Anwendung
Der Anti-Alkalische Phosphatase-Antikörper, E. coli, nur bakteriell, weist den Gehalt an alkalischer Phosphatase nach und wurde für die Verwendung in IP, WB und IC publiziert und validiert.
Western Blot mit 1:5.000. 42–45 kDa auf SDS-PAGE, reduzierende Gele für natürliches Monomer der alkalischen Phosphatase von E. coli. Fusionsproteine der alkalischen Phosphatase variieren in Abhängigkeit vom Ziel-Fusionsprotein.
Immunzytochemie: Reagiert mit E.-coli.- AP-Ziel-Fusionsprotein in acetonfixierten Zellpräparaten. 1:4000, andere Fixiermittel oder Bedingungen nicht getestet.
ASSAY:
Herstellung von E.-coli-TnphoA-Transformanten: Der E.-coli-Stamm CC118 wurde mit dem Plasmid pGEM-3Z transformiert, das TnphoA-Insertionsmutationen im P101-Gen von Mycoplasma hyorhinis enthält, das für ein Protein mit einem typischen N-terminalen prokaryotischen Einzelpeptid kodiert (Yogev et al. 1991).
Identifikation von Fusionsproteinen mit MAB1012-Transformanten: Die Transformanten werden in 2XYT-Medium bis OD600 = 0,6 kultiviert. Die Zellen wurden 3 Minuten lang bei 10.000 x g zentrifugiert, in SDS-PAGE-Probenpuffer suspendiert, 5 Minuten lang bei 100 °C erhitzt, eingefroren und aufgetaut und wie oben beschrieben bei Raumtemperatur zentrifugiert, um unlösliches Material zu entfernen. Die Probe wird auf ein 9%iges SDS-PAGE-Gel aufgetragen und der Western-Immunblot wird wie beschrieben durchgeführt (Yogev et al. 1991).
Immunpräzipitation: 5μl Antikörper pro 500μl Lysat in RIPA- oder 0,5%igen Triton-X-100-Lösungen.
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.
Immunzytochemie: Reagiert mit E.-coli.- AP-Ziel-Fusionsprotein in acetonfixierten Zellpräparaten. 1:4000, andere Fixiermittel oder Bedingungen nicht getestet.
ASSAY:
Herstellung von E.-coli-TnphoA-Transformanten: Der E.-coli-Stamm CC118 wurde mit dem Plasmid pGEM-3Z transformiert, das TnphoA-Insertionsmutationen im P101-Gen von Mycoplasma hyorhinis enthält, das für ein Protein mit einem typischen N-terminalen prokaryotischen Einzelpeptid kodiert (Yogev et al. 1991).
Identifikation von Fusionsproteinen mit MAB1012-Transformanten: Die Transformanten werden in 2XYT-Medium bis OD600 = 0,6 kultiviert. Die Zellen wurden 3 Minuten lang bei 10.000 x g zentrifugiert, in SDS-PAGE-Probenpuffer suspendiert, 5 Minuten lang bei 100 °C erhitzt, eingefroren und aufgetaut und wie oben beschrieben bei Raumtemperatur zentrifugiert, um unlösliches Material zu entfernen. Die Probe wird auf ein 9%iges SDS-PAGE-Gel aufgetragen und der Western-Immunblot wird wie beschrieben durchgeführt (Yogev et al. 1991).
Immunpräzipitation: 5μl Antikörper pro 500μl Lysat in RIPA- oder 0,5%igen Triton-X-100-Lösungen.
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.
Physikalische Form
Aszites. Enthält keine Konservierungsmittel.
Rechtliche Hinweise
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 1
Flammpunkt (°F)
Not applicable
Flammpunkt (°C)
Not applicable
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Sequence and TnphoA analysis of a Mycoplasma hyorhinis protein with membrane export function.
Yogev, D, et al.
Journal of Bacteriology, 173, 2035-2044 (1991)
A genetic approach to analyzing membrane protein topology.
Manoil, C and Beckwith, J
Science (New York, N.Y.), 233, 1403-1408 (1986)
Both the stroma and thylakoid lumen of tobacco chloroplasts are competent for the formation of disulphide bonds in recombinant proteins.
Julia Bally,Eric Paget,Michel Droux,Claudette Job,Dominique Job,Manuel Dubald
Plant Biotechnology Journal null
Fusions of secreted proteins to alkaline phosphatase: an approach for studying protein secretion.
Hoffman, C S and Wright, A
Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 82, 5107-5111 (1985)
TnphoA: a transposon probe for protein export signals.
Manoil, C and Beckwith, J
Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 82, 8129-8133 (1985)
Unser Team von Wissenschaftlern verfügt über Erfahrung in allen Forschungsbereichen einschließlich Life Science, Materialwissenschaften, chemischer Synthese, Chromatographie, Analytik und vielen mehr..
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