Allgemeine Beschreibung
CRISPR-assoziierte Endonuklease Cas9 (UniProt: J7RUA5; auch bekannt unter den Bezeichnungen SaCas9, Cas9) wird vom Cas9-Gen in Streptococcus aureus codiert. Cas9 gehört zur Subtyp-II-A-Unterfamilie mit einer HNH-Domäne vom Cas9-Typ. CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) ist ein adaptives Immunsystem, das Schutz vor mobilen genetischen Elementen (Viren, Transposonen und konjugativen Plasmiden) bietet. CRISPR-Cluster enthalten Spacer, mit früheren mobilen Elementen komplementäre Sequenzen, und sind gegen eindringende Nukleinsäuren gerichtet. Die Struktur von Cas9 besteht aus zwei Lappen, dem REC-Lappen (recognition lobe, Reste 41-425) und dem diskontinuierlichen NUC-Lappen (nuclease lobe, Reste 1-40 und 453-1053); die crRNA-Ziel-DNA liegt in einem Kanal zwischen den beiden Lappen. Der NUC-Lappen besitzt zwei Endonuklease-Domänen. Die diskontinuierliche RuvC-like Domäne im NUC-Lappen spaltet die Ziel-DNA nicht-komplementär zur crRNA, während die HNH-Nukleasedomäne die Ziel-DNA komplementär zur crRNA spaltet. Cas9 fungiert als RNA-geleitete DNA-Endonuklease, die doppelstrangige DNA-Ziele mit einem Sequenzmotiv PAM (protospacer adjacent motif) komplementär zur leitenden RNA spaltet. Die homologe Region von Streptococcus pyogenes ist mit der Aminosäuresequenz von S. aureus nicht eng verwandt; daher erkennt dieser Antikörper jenes Protein nicht.
Spezifität
Dieser polyklonale Hühnerantikörper detektiert Cas9 von Staphylococcus aureus. Er zielt auf ein Epitop innerhalb von 251 Aminosäuren am C-terminalen Ende ab. Dieser Antikörper reagiert nicht mit Cas9 von Streptococcus pyogenes.
Immunogen
Epitop: C-Terminus
His-markiertes rekombinantes Fragment, 251 Aminosäuren des C-terminalen Endes der CRISPR-assoziierten Endonuklease Cas9 von Staphylococcus aureus entsprechend.
Anwendung
Anti-Cas9 (polyklonaler Antikörper vom Huhn), Best.-Nr. AB356492, ist ein hochspezifischer polyklonaler Antikörper vom Huhn, der gegen die CRISPR-assoziierte Endonuklease Cas9 gerichtet ist und mittels Immunfluoreszenz und Western Blotting getestet wurde.
Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion
Western-Blot-Analyse: Eine repräsentative Charge in einer Verdünnung von 1:1.000 wies Cas9 in mit GFP-Cas9 von Staphylococcus aureus transfizierten HEK-293-Zellen nach.
Immunfluoreszenz-Analyse: Eine repräsentative Charge in einer Verdünnung von 1:1.000 wies Cas9 in mit GFP-Cas9 von Staphylococcus aureus transfizierten HEK-293-Zellen nach.
Qualität
Beurteilt mittels Western Blotting in mit GFP-Cas9 von Staphylococcus aureus transfizierten HEK-293-Zellen.
Western-Blot-Analyse: Bei einer Verdünnung von 1:2.000 wies dieser Antikörper Cas9 in 40 µg Lysat aus mit GFP-Cas9 von Staphylococcus aureus transfizierten HEK-293-Zellen nach.
Zielbeschreibung
~ 57 kDa gemessen. In einigen Lysat(en) können uncharakterisierte Banden beobachtet werden.
Physikalische Form
Format: Nicht aufgereinigt
Nicht aufgereinigt
Polyklonaler Hühnerantikörper in PBS mit 0,02 % Natriumazid.
Lagerung und Haltbarkeit
Bei -20 °C 1 Jahr ab Empfangsdatum haltbar. Empfehlungen zur Handhabung: Das Fläschchen nach Empfang und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können.
Sonstige Hinweise
Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.
Haftungsausschluss
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