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Proteinase K, lyophilisiert

Highly active serine protease that exhibits broad cleavage specificity on native and denatured proteins and is widely used in the purification of DNA and RNA.

• Synonym(e): Proteinase K aus Tritirachium album, Endopeptidase K
• CAS-Nummer: 39450-01-6
• EC-Nummer: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• MDL-Nummer: MFCD00132129
• UNSPSC-Code: 12352202
• NACRES: NA.85

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 400
• Form: solid
• Mol-Gew.: 28.93 kDa
• Hersteller/Markenname: Novagen^®
• Lagerbedingungen: OK to freeze
• Methode(n): DNA extraction: suitable
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: 2-8°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Proteinase K ist eine hoch aktive 28.904-Da-Serinprotease, die aus dem Pilz Tritirachium album isoliert wird. Das Enzym zeigt eine breite Spaltungsspezifität für native und denaturierte Proteine und wird häufig bei der Aufreinigung von DNA und RNA eingesetzt. Seine Aktivität wird in Gegenwart denaturierender Stoffe wie SDS (1 %) und bei erhöhten Temperaturen (50 bis 60 °C) gesteigert. Die empfohlene Arbeitskonzentration beträgt 50 bis 100 µg/mL für die Entfernung von Proteinen und Inaktivierung von Enzymen, und bis zu 2 mg/mL für die Behandlung von Geweben. Das lyophilisierte Proteinase-K-Pulver kann als 20-mg/mL-Stammlösung in Wasser angesetzt in Aliquots bei -20 °C aufbewahrt werden. Das Enzym ist auch als gebrauchsfertige konzentrierte Stammlösung (600 mAU/mL) erhältlich, die praktisch für die routinemäßige Verwendung in den meisten Anwendungen ist. 1 mg Proteinase K entspricht 30 mAU (AU = Anson Unit / Anson-Einheit). Die Proteinase-K-Produkte von Novagen sind frei von nachweisbarer DNase und RNase.

Anwendung

Nützlich zur proteolytischen Inaktivierung von Nukleasen bei der Isolierung von DNA und RNA.
Entfernt Endotoxine, die an kationische Proteine wie Lysozym und Ribonuklease A binden.
Berichten zufolge nützlich für die Isolierung von Leber-, Hefe- und Mungbohnen-Mitochondrien
Bestimmung der Enzymlokalisierung auf Membranen
Behandlung von Paraffinschnitten zur Freilegung von Antigenbindungsstellen zur Antikörpermarkierung.
Verdauung von Proteinen aus Hirngewebeproben für Prionen in der TSE-Forschung.

Biochem./physiol. Wirkung

Proteinase K ist eine stabile und hochreaktive Serinprotease. Ergebnisse von Kristall- und Molekularstrukturstudien lassen darauf schließen, dass das Enzym zur Subtilisin-Familie mit einer katalytischen Triade (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴) im aktiven Zentrum gehört. Es ist in einer Reihe von Umgebungen stabil: pH, Puffersalze, Detergenzien (SDS) und Temperatur. In Gegenwart von 0,1–0,5 % SDS bleibt Proteinase K aktiv und verdaut zahlreiche Proteine und Nukleasen in DNA-Präparationen, ohne die Integrität der isolierten DNA zu beeinträchtigen.

Warnhinweis

Toxizität: Gesundheitsschädlich (C)

Einheitendefinition

Eine AU (AU = Anson Unit / Anson-Einheit) ist definiert als die Enzymmenge, die bei pH 7,5 und 37 °C pro Minute 1,0 µmol (181 µg) Tyrosin aus Kasein freisetzt.

Rechtliche Hinweise

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS07
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H315,H319,H334,H335
• P-Sätze: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable