17-625
ChIPAb+-Trimethyl-Histon H3 (Lys9) - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set
from rabbit
Synonym(e):
H3K9me3, Histone H3 (tri methyl K9), Histone H3K9me3
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About This Item
UNSPSC-Code:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
Empfohlene Produkte
Biologische Quelle
rabbit
Qualitätsniveau
Klon
polyclonal
Speziesreaktivität
human, mouse, vertebrates
Hersteller/Markenname
ChIPAb+
Upstate®
Methode(n)
ChIP: suitable
dot blot: suitable
western blot: suitable
NCBI-Hinterlegungsnummer
UniProt-Hinterlegungsnummer
Versandbedingung
dry ice
Angaben zum Gen
human ... H3F3B(3021)
Verwandte Kategorien
Allgemeine Beschreibung
Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Set enthält den Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper, einen Negativkontrolle-Antikörper (aufgereinigtes Kaninchen-IgG) und qPCR-Primer, die eine 117-bp-Region innerhalb des 3’-Endes des humanen ZNF554-Gens amplifizieren. Das Trimethyl-Histon H3 (Lys9) und die Negativkontrolle-Antikörper werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.
Das ChIPAb+-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Set enthält den Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper, einen Negativkontrolle-Antikörper (aufgereinigtes Kaninchen-IgG) und qPCR-Primer, die eine 117-bp-Region innerhalb des 3’-Endes des humanen ZNF554-Gens amplifizieren. Das Trimethyl-Histon H3 (Lys9) und die Negativkontrolle-Antikörper werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.
Die Methylierung von Histonen kann an zwei verschiedenen Resten erfolgen: Arginin oder Lysin. Die Histon-Methylierung kann, abhängig vom methylierten Rest, mit einer Transkriptionsaktivierung oder -unterdrückung in Zusammenhang stehen. Lysin 9 von Histon H3 kann durch verschiedene Histon-Methyltransferasen (HMT) wie SuvH39H1 oder G9a mono-, di- oder trimethyliert werden. Dieses methylierte Lysin kann durch Histon-Demethylasen wie JMJD1A, LSD1 oder JMJD2C demethyliert werden. Die Methylierung dieses Rests ist primär mit der Transkriptionsunterdrückung assoziiert.
Spezifität
Die Immunogensequenz ist bei einem breiten Spektrum von Tier- und Pflanzenspezies identisch, weshalb eine weitreichende Kreuzreaktivität erwartet wird.
Erkennt Histon H3, Molekülmasse 17 kDa, an Lysin 9 trimethyliert.
Immunogen
Der aufgereinigte Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper wurde gegen an BSA konjugiertes, synthetisches Peptid, das die Sequenz …AR[me3K]S… enthält, wobei me3K dem Trimethyl-Lysin 9 von humanem Histon H3 entspricht, entwickelt.
Anwendung
Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin, das aus 2 x 106 HeLa-Zellen hergestellt wurde, wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μg aufgereinigtem Antikörper oder normalem Kaninchen-IgG und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen.
Die erfolgreiche Anreicherung von mit Trimethyl-Histon H3 (Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für GAPDH, die den humanen GAPDH-Promotor flankieren, und Primern, die auf den Promotor von humanem MyoD abzielen, verifiziert.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf die Protokolle für das EZ-Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP Kit (Katalognr. 17-371).
Western-Blot-Analyse:
Rekombinantes Histon H3 (Bahn 1) und HeLa-Säureextrakte (Bahn 2) wurden durch Elektrophorese aufgelöst, auf Nitrocellulose übertragen und mit Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys9) (1 μg/ml) geprüft. Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem veranschaulicht (siehe Abbildungen).
Beadlyte Histon-Peptid-Spezifitätsassay:
0,5 μg/ml aufgereinigter Anti-Dimethy-Histon H3 (Lys9) wurde mit einem an Histon H3-Peptide mit folgenden Modifikationen konjugierten Mikrosphären-Cocktail inkubiert:
1. Trimethyl-Lysin 9
2. Dimethyl-Lysin 9
3. Monomethyl-Lysin 9
4. Nichtmodifiziertes H3
Der ungebundene Antikörper wurde anschließend durch Filtration entfernt. Peptid-Antikörper-Komplexe wurden mit einem an PE konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper inkubiert. Die Fluoreszenz wurde auf einem Luminex 100-Instrument gemessen. Die mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) wird grafisch dargestellt.
Beschalltes Chromatin, das aus 2 x 106 HeLa-Zellen hergestellt wurde, wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μg aufgereinigtem Antikörper oder normalem Kaninchen-IgG und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen.
Die erfolgreiche Anreicherung von mit Trimethyl-Histon H3 (Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für GAPDH, die den humanen GAPDH-Promotor flankieren, und Primern, die auf den Promotor von humanem MyoD abzielen, verifiziert.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf die Protokolle für das EZ-Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP Kit (Katalognr. 17-371).
Western-Blot-Analyse:
Rekombinantes Histon H3 (Bahn 1) und HeLa-Säureextrakte (Bahn 2) wurden durch Elektrophorese aufgelöst, auf Nitrocellulose übertragen und mit Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys9) (1 μg/ml) geprüft. Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem veranschaulicht (siehe Abbildungen).
Beadlyte Histon-Peptid-Spezifitätsassay:
0,5 μg/ml aufgereinigter Anti-Dimethy-Histon H3 (Lys9) wurde mit einem an Histon H3-Peptide mit folgenden Modifikationen konjugierten Mikrosphären-Cocktail inkubiert:
1. Trimethyl-Lysin 9
2. Dimethyl-Lysin 9
3. Monomethyl-Lysin 9
4. Nichtmodifiziertes H3
Der ungebundene Antikörper wurde anschließend durch Filtration entfernt. Peptid-Antikörper-Komplexe wurden mit einem an PE konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper inkubiert. Die Fluoreszenz wurde auf einem Luminex 100-Instrument gemessen. Die mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) wird grafisch dargestellt.
Durch ChIP validiertes Trimethyl-Histon H3 (Lys9)-Antikörper- und Primer-Set, einschließlich Antikörper in ChIP-Qualität und spezifische Kontroll-PCR-Primer für die Chromatin-Immunpräzipitation von H3K9Me3.
Komponenten
Polyklonaler Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper, 1 Fläschchen
ZNF554-Primer-Set, 1 Fläschchen
ZNF554-Primer-Set, 1 Fläschchen
Qualität
Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus 3 x 106 NIH/3T3-L1-Zellen wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 4 µg normalem Kaninchen-IgG oder Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen. Die erfolgreiche Anreicherung von mit Acetyl-Histon-H3(Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für ZNF554 verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für EZ-Magna A ChIP (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).
Beschalltes Chromatin aus 3 x 106 NIH/3T3-L1-Zellen wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 4 µg normalem Kaninchen-IgG oder Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen. Die erfolgreiche Anreicherung von mit Acetyl-Histon-H3(Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für ZNF554 verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für EZ-Magna A ChIP (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).
Zielbeschreibung
17 kDa
Physikalische Form
Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys9) (polyklonales Kaninchen-IgG). Ein Fläschchen mit 100 μg mit Protein A aufgereinigtem IgG in 100 μl 0,02-mol/l-Phosphatpuffer, pH-Wert 7,4, 0,25 mol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid und 30 % Glycerin. Bei -20 °C aufbewahren.
Normales Kaninchen-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg normalem Kaninchen-IgG in 125 μl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.
ChIP-Primer, ZNF554. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für ZNF554. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: CGG GGA AAA GCC CTA TAA AT
REV: TCC ACA TTC ACT GCA TTC GT
Normales Kaninchen-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg normalem Kaninchen-IgG in 125 μl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.
ChIP-Primer, ZNF554. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für ZNF554. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: CGG GGA AAA GCC CTA TAA AT
REV: TCC ACA TTC ACT GCA TTC GT
Format: Aufgereinigt
Hinweis zur Analyse
Kontrolle
Einschließlich Kaninchen-IgG-Antikörper als Negativkontrolle und für ZNF554 spezifische Kontrollprimer.
Einschließlich Kaninchen-IgG-Antikörper als Negativkontrolle und für ZNF554 spezifische Kontrollprimer.
Rechtliche Hinweise
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
Analysenzertifikate (COA)
Suchen Sie nach Analysenzertifikate (COA), indem Sie die Lot-/Chargennummer des Produkts eingeben. Lot- und Chargennummern sind auf dem Produktetikett hinter den Wörtern ‘Lot’ oder ‘Batch’ (Lot oder Charge) zu finden.
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Dicer independent small RNAs associate with telomeric heterochromatin.
Cao, F; Li, X; Hiew, S; Brady, H; Liu, Y; Dou, Y
RNA null
Ping K Chan et al.
Human molecular genetics, 22(13), 2662-2675 (2013-03-12)
Large intronic expansions of the triplet-repeat sequence (GAA.TTC) cause transcriptional repression of the Frataxin gene (FXN) leading to Friedreich's ataxia (FRDA). We previously found that GAA-triplet expansions stimulate heterochromatinization in vivo in transgenic mice. We report here using chromosome conformation
Polycomb repressive complex 2 regulates normal hematopoietic stem cell function in a developmental-stage-specific manner.
Xie, H; Xu, J; Hsu, JH; Nguyen, M; Fujiwara, Y; Peng, C; Orkin, SH
Cell Stem Cell null
Youhua Tan et al.
Biochemical and biophysical research communications, 483(1), 456-462 (2016-12-23)
Tumor-repopulating cells (TRCs) are a tumorigenic sub-population of cancer cells that drives tumorigenesis. We have recently reported that soft fibrin matrices maintain TRC growth by promoting histone 3 lysine 9 (H3K9) demethylation and Sox2 expression and that Cdc42 expression influences
A Maya-Mendoza et al.
Cell death & disease, 5, e1351-e1351 (2014-07-25)
Mammalian cells have mechanisms to counteract the effects of metabolic and exogenous stresses, many of that would be mutagenic if ignored. Damage arising during DNA replication is a major source of mutagenesis. The extent of damage dictates whether cells undergo
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