03-110

RIPAb+ Ago2 – durch RIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

ascites fluid, from mouse

• Synonym(e): Argonaute-2, Eukaryotic translation initiation factor 2C, Slicer protein, Piwi domain protein
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.52

Eigenschaften

• Biologische Quelle: mouse
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: ascites fluid
• Klon: monoclonal
• Speziesreaktivität: human
• Speziesreaktivität (Voraussage durch Homologie): bovine
• Hersteller/Markenname: RIPAb+; Upstate^®
• Methode(n): RIP: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgG1κ
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_001158095.1
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q9UKV8
• Versandbedingung: dry ice

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

AGO2 (Argonautenprotein-2), auch als eukaryotischer Translationsinitiationsfaktor 2C (EIF2C2) bekannt, ist eine essenzielle Komponente der siRNA-gesteuerten RNA-Interferenz (RNAi)-Antwort. AGO2 ist eine Endonuklease, die für das Auseinanderwickeln des siRNA-Duplexes und die Anordnung von siRNA zu RNA-induced-silencing-complexes (RISC) erforderlich ist. AGO2 interagiert mit durch seine Piwi-Domäne mit DICER1. Es wird angenommen, dass diese Piwi-Domäne durch einen ähnlichen Mechanismus wie RNASE H eine RNA-Spaltungsaktivität bereitstellt. Die AGO2-Aktivität ist notwendig für die Embryonenentwicklung sowie für das RNA-vermittelte Gene-Silencing (RNAi).

Spezifität

Erkennt Ago2.

Immunogen

An KLH-konjugiertes, synthetisches Peptid, das die Sequenz YSGAGPALAPPAPPPPIQG enthält.

Anwendung

RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation (microRNA):
Aus HeLa-Zellen (2 x 10⁷ Zelläquivalente je IP) präpariertes RIP-Lysat wurde einer Immunpräzipitation mit entweder 5 µl normalem Maus-IgG oder 5 µl Anti-Ago2-Antikörper und dem Magna RIP^® RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitationskit (Art.- Nr. 17-700) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation der Ago2-assoziierten microRNA wurde mit dem TaqMan microRNA-Assay, hsa-miR-23a, verifiziert. (Siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich auf das Protokoll Magna RIP (Art.- Nr. 17-700) oder EZ-Magna RIP (Art.- Nr. 17-701) für experimentelle Details.


Immunpräzipitation aus RIP-Lysat:
Daten einer repräsentativen Charge.
Ein RIP-Lysat aus HeLa-Zellen (2 x 10⁶ Zelläquivalente je IP) wurde einer Immunpräzipitation mit entweder 0,5 µl normalem Maus-IgG oder Anti-Ago2-Antikörper unterzogen. Die ausgefällten Proteine (Bahn 1: Maus-IgG, Bahn 2: Anti-Ago2) und das HeLa-Ganzzelllysat (Bahn 3) wurden mittels Elektrophorese aufgetrennt, auf Nitrocellulose übertragen und mit dem Anti-Ago2-Antikörper (Verdünnung 1:5.000) getestet.
Die Proteine wurden mit an HRP konjugiertem Anti-Maus-Sekundärantikörper der Ziege und Chemilumineszenz-Nachweis visualisiert.
(Siehe Abbildungen).

Dieses durch RIP validierte RIPAb+-Ago2-Antikörper- und Primer-Set enthält praktischerweise den Antikörper und die spezifischen Kontroll-PCR-Primer.

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

Forschungsunterkategorie
RNA-Metabolismus und Bindungsproteine

RNA-Bindungsprotein (RBP)

Verpackung

10 Assays je Set. Empfohlene Verwendung: ~5 μl Antikörper je RIP (abhängig vom biologischen Kontext).

Qualität

RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation:
Aus HeLa-Zellen (2 x 10⁷ Zelläquivalente je IP) präpariertes RIP-Lysat wurde einer Immunpräzipitation mit entweder 5 µl normalem Maus-IgG oder 5 µl Anti-Ago2-Antikörper und dem Magna RIP^® RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitationskit (Art.- Nr. 17-700) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation der Ago2-assoziierten RNA wurde mittels qPCR unter Verwendung von RIP-Primern, FOS, verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich auf das Protokoll Magna RIP (Art.- Nr. 17-700) oder EZ-Magna RIP (Art.- Nr. 17-701) für experimentelle Details.

Zielbeschreibung

100 kDa

Physikalische Form

Anti-Ago2 (monoklonales Maus-IgG1κ). Ein Fläschchen mit 50 µl Aszitesflüssigkeit mit 0,05 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Maus-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg aufgereinigtem Maus-IgG in 125 µl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

RIP-Primer, FOS. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μM jedes spezifischen Primers für das humane FOS-Gen. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: GAG AGC TGG TAG TTA GTA GCA TGT TGA
REV: AAT TCC AAT AAT GAA CCC AAT AGA TTA GTT A

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.
Handhabungsempfehlungen: Das Fläschchen nach Empfang und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Einschließlich Maus-IgG-Antikörper als Negativkontrolle und für humanes FOS spezifische Kontrollprimer.

Rechtliche Hinweise

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

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