Clonación molecular y expresión de proteínas
El objetivo de la clonación molecular es introducir el gen de interés (GOI) en un vector plasmídico, una pieza circular de ADN que contiene varios elementos para facilitar el clonado, la selección del clon y la expresión de proteínas. Los investigadores a menudo utilizan enzimas de restricción del ADN y ligasas para insertar el GOI en un marco dentro del vector de expresión para la subsiguiente expresión de la proteína. Este vector se inserta luego en una célula que expresará la proteína codificada por el GOI o se consigue la expresión de la proteína utilizando sistemas de síntesis proteica sin células.
Una vez expresada la proteína, puede estudiarse su función, es decir, si afecta a la comunicación celular, su morfología u otros aspectos intracelulares. Alternativamente la proteína puede expresarse en grandes cantidades, purificarse y utilizarse en numerosas aplicaciones posteriores. Si desea más información, consulte nuestra completa oferta de reactivos y recursos fiables disponibles para toda la secuencia de trabajo de clonado y expresión en los sistemas de expresión proteica de mamíferos, bacterias e insectos.
Enzimas de restricción y enzimas modificadoras del ADN
En la clonación molecular, los investigadores suelen utilizar dos tipos generales de enzimas, las enzimas de restricción para cortar el ADN y las enzimas modificadoras para hacer modificaciones en los ácidos nucleicos, a menudo antes de la etapa de ligadura. Explore nuestra amplia gama de enzimas de restricción y otras enzimas modificadoras, como la fosfatasa alcalina, las proteasas, la ARN polimerasa T7, la ribonucleasa A y la ADN ligasa T4 para satisfacer todos sus requisitos experimentales.
Sistemas de expresión sin células y vectores de expresión utilizando promotores CMV y tecnología de etiquetas FLAG®
Nuestra cartera de clonación y expresión abarata y hace más eficiente la ingeniería genética al proporcionar una colección de vectores versátiles con protocolos y kits de clonación optimizados. Elija entre nuestra amplia gama de sistemas de clonación y expresión, incluido nuestro sistema de síntesis o expresión de proteínas sin células, como el kit de expresión de proteínas sin células de última generación (germen de trigo) (nº de referencia CFPS700) y el kit ALiCE® (nº de ref. AL0103000. Además, descubra los vectores de expresión bacterianos y de mamíferos FLAG® para la expresión periplasmática o citoplásmica en sistemas de transfección transitoria o estable y exprese con confianza su secuencia FLAG® o 3X FLAG® en el extremo N o C terminal con un sitio de escisión de enterocinasa (Ek) para eliminar la etiqueta de fusión si es necesario.
Sistemas de expresión de proteínas Novagen® pET, vectores SnapFast™, vectores Simplicon™ y UCOE™
Todos los vectores de expresión de E. coli y los vectores de expresión de insectos confieren resistencia a la ampicilina para facilitar la selección de transformantes positivos. Descubra el sistema Novagen® pET, la referencia para la clonación y la expresión de proteínas recombinantes en la expresión bacteriana. Diseñada por Oxford Genetics, la familia de vectores SnapFast™ ofrece un protocolo rápido y sencillo que permite la transferencia de un GOI de un vector a otro utilizando los puntos de corte SnapFast™, generando vectores compatibles con los sistemas de expresión de insectos, levaduras, bacterias y mamíferos. Con nuestra tecnología de vectores de expresión de elementos ubicuos de apertura de la cromatina (UCOE™), puede conseguir gramos de proteína en menos de 30 días en células de mamífero transfectadas de forma estable. La tecnología de expresión UCOE™ evita el silenciamiento del transgén y ofrece una expresión genética uniforme estable y de alto nivel, hasta 20 veces superior a la de los vectores convencionales, con independencia del sitio de integración en el cromosoma. El sistema Simplicon™ de expresión de proteínas in vivo es un sistema de expresión sintético de ARN autorreplicante no integrable en el genoma y ajustable que genera una expresión inmediata y muy sostenida de proteínas de múltiples genes en células humanas transfectadas sin el riesgo de integración genómica. Para obtener más información, consulte nuestro vídeo de tecnología Simplicon™ utilizada para la generación eficiente de iPSC humanas.
Reactivos y recursos para la transformación de bacterias y levaduras
La transformación bacteriana es el proceso de inserción de ADN extraño en bacterias utilizando métodos como el choque térmico y la electroporación. Nuestra cartera de células competentes está diseñada para una expresión óptima de proteínas incluso para las proteínas recombinantes más desafiantes. Explore nuestra guía de selección de células competentes para elegir entre una variedad de nuevas células bacterianas competentes para una amplia variedad de aplicaciones, como la expresión de proteínas, la clonación sistemática o compleja y la generación de colecciones. Además, la expresión de proteínas recombinantes en Saccharomyces cerevisiae tiene muchas ventajas, como protocolos sencillos, uso de reactivos básicos y escalabilidad. Explore los numerosos productos disponibles para la transformación de levaduras como parte de la secuencia de trabajo de expresión proteica. Nuestras células competentes NovaBlue®, optimizadas para la eficacia de la transfección y la conservación de plásmidos, propician preparaciones de superiores de bancos y estabilidad de los plásmidos. Además, las células competentes Novagen® están diseñadas para facilitar el plegamiento adecuado de las proteínas, una mayor solubilidad o la expresión de proteínas citotóxicas. Las marcas más populares son los sistemas Rosetta™, Origami™ y Overnight Express™.
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