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MilliporeSigma

2GRHSRMKB

Roche

Mezcla lista para usar KAPA2G Robust de inicio en caliente

2 × ( contains 2 mM MgCl2 at 1×)

Sinónimos:

PCR, PCR de inicio de caliente

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About This Item

UNSPSC Code:
41106300
NACRES:
NA.55

usage

sufficient for 100 reactions
sufficient for 500 reactions

Quality Level

shelf life

≤12 mo.

feature

Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR
dNTPs included
hotstart

packaging

kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5701)
kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5702)

manufacturer/tradename

Roche

concentration

2 × ( contains 2 mM MgCl2 at 1×)

technique(s)

PCR: suitable

input

crude DNA

storage temp.

−20°C

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General description

La segunda generación de la ADN polimerasa KAPA2G Robust evolucionó para resolver amplificaciones no uniformes a lo largo de una amplia gama de tipos de amplicones (ricos en GC y en AT). La mezcla KAPA2G Robust HotStart® ReadyMix permite una mayor procesividad y actividad específica, lo que se traduce en un rendimiento robusto de la PCR, una elevada sensibilidad y una mayor tolerancia a inhibidores comunes. El gran rendimiento de la ADN polimerasa KAPA2G Robust es idealmente adecuado para aplicaciones de PCR complejas y muestras difíciles, al eliminar la necesidad de optimización mediante el empleo de múltiples enzimas y protocolos.

Application

La mezcla lista para usar KAPA2G Robust HotStart® ReadyMix se ha utilizado para:
  • la amplificación de plantillas ricas GC o AT
  • la amplificación de plantillas que contienen inhibidores comunes de la la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), por ejemplo, sales, urea, SDS o etanol
  • muestra de PCR sin procesar, por ejemplo, hisopos bucales, células bacterianas, de levaduras o mamíferos cultivadas
  • PCR de colonias
  • extracción y amplificación de ADN
  • detección de mutaciones
  • amplificación con PCR específica de metilación (MSP)
  • genotipado-PCR
  • secuenciación basada en PCR

Biochem/physiol Actions

Los fragmentos de ADN generados con la ADN polimerasa KAPA2G Robust HotStart® tienen las mismas características que los fragmentos de ADN producidos con la ADN polimerasa Taq de tipo natural y pueden utilizarse para rutinas de para análisis o aplicaciones posteriores habituales, como la digestión con enzimas de restricción, la clonación y la secuenciación. Igual que la Taq natural, la KAPA2G Robust HotStart tiene actividades 5′→3′ polimerasa′ y 5′→3′ exonucleasa, pero no actividad 3′→5′ exonucleasa (corrección de errores). La fidelidad de la KAPA2G Robust HotStart es similar a la de la Taq natural; tiene una tasa de error de aproximadamente 1 error por cada 1,7 x 10 5 nucleótidos incorporados. Los productos de la PCR generados con la KAPA2G Robust HotStart tienen una cola de 3′-dA y pueden clonarse en vectores de clonación TA.

Features and Benefits

Amplificación eficiente de muestras ricas en GC y AT
  • Eficiencia robusta a través de una amplia variedad de plantillas ricas en GC y AT
  • Mayor tasa de éxito de la PCR

Mayor tolerancia a los inhibidores comunes de la PCR
  • Amplificación eficiente de muestras sin procesar
  • Mayores rendimiento y sensibilidad por unidad de enzima

Rendimiento sin igual en la PCR de colonias
  • Mayores rendimientos y mayor uniformidad de la PCR directa de células de E. coli y levadura

Notas rápidas:
  • Los kits para PCR KAPA2G Robust HotStart ReadyMix contienen la ADN polimerasa KAPA2G Robust diseñada mediante ingeniería genética para una elevada procesividad y tolerancia a inhibidores.
  • Pueden utilizarse como plantillas muestras de ADN genómico purificadas y muestras sin procesar (por ejemplo, PCR de colonias).
  • Utilice un tiempo de extensión de 15 segundo/kb por ciclo y aumente a 30-60segundos/kb para amplicones o plantillas difíciles.
  • La mezcla de reacción KAPA2G Robust HotStart ReadyMix contiene MgCl2 2 mM a concentración 1X.
  • La mezcla KAPA2G Robust HotStart ReadyMix con colorante incluye dos colorantes de seguimiento inertes para permitir la carga directa en geles de agarosa.
  • La mezcla KAPA2G Robust HotStart ReadyMix es ideal para PCR de protocolo único, es decir, amplificación de fragmentos que van del 65 al 25% de GC, hasta 1 kb de tamaño, utilizando una configuración y protocolo de ciclado de reacción única.
  • Los productos de reacción tienen una cola de 3′-dA y pueden clonarse en vectores de clonación TA.

Quality

Se confirma que cada lote de ADN polimerasa KAPA2G Robust HotStart contiene <2 % de proteínas contaminantes (valoración Agilent Protein 230). Los kits para PCR KAPA2G Robust HotStart ReadyMix están sometidos a estrictas pruebas de control de calidad, carecen de actividad exonucleasa y endonucleasa contaminante y cumplen estrictos requisitos con respecto a los niveles de contaminación del ADN.

Preparation Note

Asegurarse siempre de que el producto se ha descongelado por completo y se ha mezclado bien antes de su uso. Los reactivos pueden conservarse a 4°C durante poco tiempo (hasta 1 mes). Para un almacenamiento prolongado, retornar a -20°C. Siempre que todos los componentes se hayan manipulado con cuidado y no se hayan contaminado, no cabe esperar que el kit se altere si se deja (accidentalmente) a temperatura ambiente un breve espacio de tiempo (hasta 3 días). No se recomienda su conservación a largo plazo a temperatura ambiente y 4°C. Tenga en cuenta que los reactivos conservados por encima de -20°C son más propensos a la degradación cuando se contaminan durante su uso y, por consiguiente, la conservación a esas temperaturas es por cuenta y riesgo del propio usuario.

Other Notes

Para uso exclusivo en investigación. No indicado para procedimientos diagnósticos.

Legal Information

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.
ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Solo componentes del kit

Referencia del producto
Descripción

  • KAPA2G Robust HotStart® DNA Polymerase 1U per 25 µL reaction

  • MgCl2 2mM at 1X

  • dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

pictograms

Exclamation markHealth hazard

signalword

Warning

hcodes

Hazard Classifications

Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2

Storage Class

12 - Non Combustible Liquids

wgk_germany

WGK 1

flash_point_f

does not flash

flash_point_c

does not flash


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