CBA023

InnoZyme组织蛋白酶L活性试剂盒，荧光

• 同義詞: Cathepsin L
• 分類程式碼代碼: 41116133
• NACRES: NA.84

屬性

• 用途: sufficient for 96 tests
• 品質等級: 100
• 包裝: pkg of 1 96-well plate(s)
• 製造商／商標名: Calbiochem^®
• 儲存條件: OK to freeze; avoid repeated freeze/thaw cycles; protect from light
• assay range: sensitivity: 1.2 ng/mL; standard curve range: 1.56-100 ng/mL
• 輸入: sample type cell lysate; sample type tissue(s); sample type purified enzyme(s) (cathepsin L)
• 檢測方法: fluorometric
• 運輸包裝: wet ice

描述

一般說明

一种用于检测人和小鼠样品中组织蛋白酶 L 的高灵敏度和选择性荧光检测法。用荧光底物 Z-Phe-Arg-AMC 检测组织蛋白酶 L（最大值激发波长：360 nm；最大发射波长：460 nm）。通过掺入抑制剂 CA 074（一种组织蛋白酶 B 特异性抑制剂）消除了组织蛋白酶 B 的干扰。该试剂盒还可用于筛选组织蛋白酶 L 抑制剂。

成分

组织蛋白酶 L 底物、AMC 校准标准品、组织蛋白酶 L 对照、组织蛋白酶 L 活化剂、CA 074、组织蛋白酶 L 抑制剂、检测缓冲液、样品缓冲液、稀释液、微孔板、板密封剂和说明书。

警告

毒性：多个毒性值，请参阅 MSDS（O）

規格

试验时间：1.5 - 2 h

原則

Calbiochem InnoZyme 组织蛋白酶 L 活性试剂盒适用于使用纯化的制剂、细胞裂解液和组织提取物测量组织蛋白酶 L 的活性，以及筛选组织蛋白酶 L 抑制剂。该测定法不适用于测量组织蛋白酶 B 的活性。

準備報告

该试剂盒提供了进行检测所需的所有试剂。使用前，将组织蛋白酶 L 对照试剂（参见下文）以外的所有试剂均置于室温。•AMC 校准标准品：AMC 校准标准品以 2 mM 的储备溶液形式提供。生成校正曲线的推荐浓度范围是 0.156-20 µM。制备下表 A 所示的校正 AMC 标准品的系列稀释液。转移液体之前先将每种稀释液涡旋，并在吸取每种稀释液时注意更换移液器吸头。•组织蛋白酶 L 对照：用样品缓冲液稀释组织蛋白酶 L 对照（10 µg/ml 储备液）来制备所需数量的组织蛋白酶 L 对照样品，浓度范围为 1.56-100 ng/ml。通常推荐的浓度为 0.078-5 ng/50 µl。使用前解冻并制备稀释的组织蛋白酶 L 对照。将剩余的组织蛋白酶 L 对照液等分并在冻存在 -70°C。•活化缓冲液：为了测量生物样品中的组织蛋白酶 L 活性，制备足够的活化缓冲液，50 µl/孔。在检测缓冲液中稀释还原试剂（1：125）和 CA 074 抑制剂（1：100）。例如：要制备 1 ml 的活化缓冲液（足以用于 16 孔试纸），在 982 µl 的检测缓冲液中添加 10 µl CA 074 抑制剂和 8 µl 还原试剂注意：要制备用于组织蛋白酶 L 抑制剂筛选的活化缓冲液不要在活化缓冲液中添加 CA 074 抑制剂；仅添加还原试剂即可。•组织蛋白酶 L 抑制剂工作溶液（1X）：用稀释液稀释组织蛋白酶 L 抑制剂（1：100）。示例：要制备 1ml 组织蛋白酶 L 抑制剂工作溶液（足以用于 16 孔试纸），将 10 µl 组织蛋白酶 L 抑制剂添加到 990 µl 稀释液中。•底物工作工作（1X）：用稀释液稀释底物（10 mM）（1：100）。示例：要制备 1 ml 底物工作溶液（足以用于 16 孔试纸），将 10 µl 底物添加到 990 µl 稀释液中。•测试抑制剂：用稀释液将任何测试抑制剂稀释至所需浓度，最终体积为 50 µl。

• 生物样品（例如粗提物）：根据需要使用样品缓冲液稀释样品。通常，建议使用 10-200 µg 蛋白质/50 µl。 • 纯化的组织蛋白酶 L 样品：如果需要，使用样品缓冲液稀释纯化的组织蛋白酶 L。通常，建议的酶量为 10-100 ng/ml。

儲存和穩定性

自收到之日起，将组织蛋白酶 L 对照品储存于 -70°C； 将所有其他未打开的组件存储于 -20°C。初次使用该试剂盒时，在以下条件下这些组件最多可以存储 3 个月：



在 4°C 下存储：检测缓冲液、样品缓冲液稀释液、96 孔板和板密封剂

储存于 -20°C：AMC 校准标准品、CA 074 抑制剂、组织蛋白酶 L 抑制剂底物和还原试剂

在 -70°C 储存：组织蛋白酶 L 对照：初次使用时分装；避免冻/融循环

分析報告

使用 AMC 校准的分析：建议使用使用线性回归曲线拟合程序的软件包来处理数据。如果没有软件包，则通过在 Y 轴上绘制每种标准物的相对荧光单位（RFU）的平均荧光与在 X 轴上相应的 AMC 浓度的关系来绘制标准曲线，通过图形上的点绘制一条最佳拟合曲线。A.含 CA074 的组织蛋白酶 L 样品的最终 RFU =（含 CA074 的组织蛋白酶 L 样品的原始（初始）RFU 值）-（空白的 RFU）B.含 CA074 和组织蛋白酶 L 抑制剂的组织蛋白酶 L 样品的最终 RFU =（含 CA 074 和组织蛋白酶 L 抑制剂的组织蛋白酶 L 样品的粗 RFU）-（空白的 RFU）C.组织蛋白酶 L 样品的校正 RFU = A 的最终 RFU- B 的最终 RFU。使用最终 RFU，可以从标准曲线内插未知样品的组织蛋白酶 L 活性，并显示为在指定时间段内释放的游离 AMC 量/mg 蛋白。没有 AMC 校准的测定：在存在 CA 074 抑制剂和组织蛋白酶 L 抑制剂的情况下，以及仅在存在 CA 074 抑制剂的情况下，应一式两份并同时在两种不同条件下平行测定所有生物样品。通过RFU 值（仅 CA 074 抑制剂）- RFU 值（CA 074 抑制剂+组织蛋白酶 L 抑制剂），可以计算出初始组织蛋白酶 L 活性（显示为 RFU）。每个样品中的最终组织蛋白酶 L 活性都显示在 RFU 中，并通过从初始 RFU 中减去空白值，然后计算重复样品的平均荧光值得出。如果样品被稀释，则将如上计算的最终组织蛋白酶 L 活性乘以稀释倍数即可获得最终组织蛋白酶 L 活性。

使用高度纯化的组织蛋白酶 L 确定的测定工作范围为 1.56-100 ng/ml 或 0.078-5 ng/测定。

阳性对照
组织蛋白酶 L

其他說明

Bohne, S., et al. 2004.J. Pathol.203, 528.
Goulet, B., et al. 2004.Mol.Cell 14, 207.
Hook, V., et al. 2004.Biol. Chem. 385, 473.
Potts, W., et al. 2004.Int. J. Exp.Pathol.85, 85.
Rousselet, N., et al. 2004. Cancer Res. 64, 146.
Schedel, J., et al. 2004.Gene Ther.11, 1040.
Troy, A.M. et al. 2004.Eur. J. Cancer 40, 1610.
Corella, R., and Casey, S.F.2003.Biotech.Histochem. 78, 101.
Ohashi, K., et al. 2003.Biochim.Biophys.Acta 1649, 30.
Friedrich, B., et al. 1999.Eur. J. Cancer 35, 138.
Cresswell P., 1998.Science 280, 394.
Yasuma, T., et al. 1998.J. Med. Chem. 41, 4301.
Kirschke, H. et al. 1982.Biochem.J. 201, 367.

由于该运输中有害物质的性质，您的订单可能需要支付额外的运输费用。某些尺寸的产品可免除其他有害材料的运输费用。请与您当地的销售办事处联系，以获取有关这些费用的更多信息。

法律資訊

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

安全資訊

• 儲存類別代碼: 10-13 - German Storage Class 10 to 13
• 水污染物質分類（WGK）: WGK 3