mRNA疫苗工艺生产

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优化质粒DNA生产

鉴于DNA模板在mRNA疫苗生产中的核心作用，其设计和纯度是优化mRNA产品的重要因素。现可采用多种不同技术。传统方法基于在细菌细胞内扩增的质粒DNA，且必须设计后续的纯化步骤来生成浓缩的纯环状pDNA，然后将其线性化。我们基于PCR的DNA模板制备技术与之截然不同，并已显现出相对其他mRNA制造技术的优势。

最大限度提高mRNA回收率

mRNA的纯度是产量和效率的关键决定因素。去除杂质可降低先天免疫反应并显著提高报告蛋白的表达水平。在体外转录之后，必须去除产品和工艺杂质，包括最终的内毒素、免疫原性双链RNA（dsRNA）、残留的DNA模板、RNA聚合酶、RNA-DNA杂交体、二级RNA结构（发夹污染物）、元素杂质。这些杂质会引起强烈的炎症反应和副作用，需在产品放行前严格管控。

保证mRNA的纯化效果

mRNA纯化可有多种选择，包括切向流过滤（TFF）、反相离子对、阴离子交换（AEX）、疏水相互作用色谱（HIC）和使用poly(dT)捕获的亲和层析。在层析步骤之后，进行最终浓缩和渗滤以最大程度提高纯度，然后将mRNA转移到适当的缓冲液中进行后续需配制或储存。

优化疫苗的递送

纯化mRNA必须配制进递送颗粒中。脂质纳米颗粒（LNP）常用于此目的，并可防止mRNA降解。为此，必须根据所需的递送路径来选择脂质，以最大限度改善功效和生物体内分布。选择脂质时需要考虑的其他因素包括类型、来源和质量。