细胞培养疑难解答

细胞培养已成为生物系统建模的一项基本技术，其在生物技术和制药领域的重要性日益突出，并且在生命科学研究实验室中也不可或缺。尽管这种技术很容易实施，但污染或其他不利于细胞存活的条件会干扰细胞的成功增殖，从而导致无法进行存储细胞扩容或建模实验。常用的共享细胞方法已被证明会导致储备细胞的交叉污染，而之前并未对此进行质疑。查明导致细胞难以正常生长的各种常见和罕见原因，有助于提高实验室效率，提升细胞产物产量并确保体外模型提供有意义且可靠的下游数据。

细胞系错误鉴定

近期的研究预估，细胞系的错误鉴定可能影响了多达三分之一在用的所有细胞系。这些发现可能会引发对基于细胞系模型而得到的生物学系统发表结果的质疑。可导致细胞系错误鉴定或交叉污染的因素包括：

• 侵袭性细胞系污染：同工酶分析表明，许多细胞系与 HeLa 细胞共享罕见的同工酶。自此，HeLa一直被证明是培养系统中最常见的侵袭性细胞系
• 记录和标记习惯：必须对细胞培养瓶、培养皿、冻存管和冻存容器进行清晰的标记，并严格对液氮储存图进行维护以反映贮藏细胞系的添加、取用和迁移。
• 细胞系借用：邻近实验室之间共享细胞是导致细胞系品系发生错误的一种常见情况。应仅从具有良好声誉的细胞贮藏机构获得细胞系，例如ECACC（英国公共卫生组织的欧洲认证细胞培养物贮藏中心）。

获悉细胞系交叉污染的常见原因 以及如何保护您的工作免受污染后果的影响。

细胞培养的微生物污染

细胞培养基和培养条件不仅为细胞，也为细菌、真菌和病毒污染物提供了理想的环境。除了严格遵守无菌培养技术外，还必须定期对培养物进行显微镜检查以确认是否存在细菌和真菌侵染的证据。一些无所不在的微生物污染物逃避目视检查，预计在全部培养中，多达30%被支原体污染。支原体检测试剂和试剂盒通常都基于PCR扩增技术，后者也可用于检测病毒污染物。

了解如何使你的培养免受生物和化学污染的影响 。

细胞生长不良

在其他方面上看起来是健康的、培养中的细胞未能达到汇合状态是一件令人沮丧的事请。在污染物被排除时，健康细胞倍增面临的一些可能障碍包括：

• 培养/冻存培养基的条件和质量
• 质量和应用 - 补充剂的适用性
• 冷冻或传代时的细胞计数不准确

当细胞看起来是活的但无法扩增时，请先了解如何改善最佳生长的培养条件，然后从液氮中取出细胞。

贴壁细胞表型的解离

贴壁细胞可以在培养中自发逐个或整片地解离。当贴壁培养物不能保持贴壁状态时， 了解如何检查以及恢复培养物的聚合力。

细胞结块

悬浮液中的细胞模拟 体内 条件形成单个结块。当细胞开始结块时，这可能是因为培养物应激时在培养基中存在的粘性核酸的缘故。培养基中隐藏着什么可能导致细胞结块的物质？在这里阅读 更多关于如何防止培养物结块的信息。

培养中的细胞死亡

当在细胞在培养中死亡时，必须首先排除微生物污染。可能会导致细胞健康状态欠佳，或行为与表型不一致的其他因素包括：

• 冻存细胞株的条件
• 细胞传代数/过度汇合
• 环境压力
• 解离酶消化过度

合适的设备、合格的试剂和专业的实验方案对 避免意外的细胞培养结果至关重要。

培养基中的沉淀

如果不是污染，培养物中的颗粒物通常可能是无机物。熟悉平衡缓冲液和培养基成分， 并了解如何使培养基成分保持悬浮状态。