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一般說明
针对蛋白质的定制生物素化，Sigma 提供了两种不同规模的偶联试剂盒。当需要高灵敏度和特异性时，生物素-抗生物素蛋白系统受到青睐。生物素可以与抗体、凝集素、酶和其他蛋白质结合。 试剂盒中的操作方案已针对抗体进行了优化。抗生物素蛋白以高亲和力（Ka= 1015 M）和特异性与生物素结合。当生物素蛋白与酶或荧光染料结合后，可通过酶促反应将底物底物转化为形成可见产物，或通过分光光度法或流式细胞术检测荧光来鉴定生物素化化合物。
應用
ImmunoProbe™生物素化试剂盒用于制备生物素标记抗体。
生物素已用氨基己酸酯修饰，然后通过与磺基-N-羟基琥珀酰亚胺 （BAC-Sulfo-NHS）的酯键活化。氨基己酸酯提供了一个六碳间隔子，可减少生物素上的空间位阻并提高亲和素上结合位点的可及性。羟基琥珀酰亚胺的磺化增加了试剂的极性，使其在水性缓冲液中易于溶解。该酯提供了与不稳定酯键相邻的羰基碳作为可及性赖氨酸残基的伯胺侧链的靶标，通过酰胺键将生物素氨基己酸酯与蛋白质连接。
特點和優勢
- 完整的标记和分析方案
- BAC-Sulfo-NHS 完全溶于水
- 不需要 DMF 或 DMSO
- 在中性 pH 和生理离子强度下实现生物素化，无需使用严苛条件，避免了损伤敏感的蛋白
- 使用凝胶过滤快速分离结合物与反应物
- 结合物中的生物素与蛋白质（对于抗体）的摩尔比为 2 至 5
每次反应 1mg 蛋白质（B-TAG）
每次反应 10mg 蛋白质（BK-101）
• 试剂足够进行 5 次标记
包裝
试剂盒包括生物素化和测定生物素/蛋白质摩尔比所需的全部试剂。
分析報告
步骤：
通过 4 个简单的步骤进行结合：
1.用磷酸盐缓冲液（PB）重悬 BAC-Sulfo-NHS。
2.将 BAC-Sulfo-NHS 加入蛋白质中，在室温下反应 30 分钟。
3.通过凝胶过滤将偶联物与反应物分离。
4.通过抗生物素蛋白-HABA 测定（仅 BK-101）测定用于生物素标记的结合物。结合物随时可用。偶联物为即用型。
通过 4 个简单的步骤进行结合：
1.用磷酸盐缓冲液（PB）重悬 BAC-Sulfo-NHS。
2.将 BAC-Sulfo-NHS 加入蛋白质中，在室温下反应 30 分钟。
3.通过凝胶过滤将偶联物与反应物分离。
4.通过抗生物素蛋白-HABA 测定（仅 BK-101）测定用于生物素标记的结合物。结合物随时可用。偶联物为即用型。
法律資訊
ImmunoProbe is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
訊號詞
Danger
危險分類
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
標靶器官
Respiratory system
儲存類別代碼
10 - Combustible liquids
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