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CSA001

Sigma-Aldrich

Rho相关激酶(ROCK)活性测定

This Rho-associated Protein Kinase (ROCK) Activity Assay Kit is an enzyme immunoassay for detection of the active ROCK & DMPK family kinases.

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About This Item

分類程式碼代碼:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.32

物種活性(以同源性預測)

all

製造商/商標名

Chemicon®

技術

activity assay: suitable

檢測方法

colorimetric

運輸包裝

ambient

一般說明

简介:

Rho家族的小GTPase蛋白是细胞行为的几个方面的关键调节因子,例如细胞运动,细胞增殖和凋亡。它们在涉及肌动蛋白细胞骨架和/或微管网络的许多运动反应中起着核心作用,从神经突延伸到吞噬作用和癌细胞侵袭。另外,它们有助于改变导致细胞周期进程或分化细胞反应的基因表达。Rho被细胞外信号(例如溶血磷脂酸(LPA))激活。Rho的作用由下游Rho效应子介导。这些效应子之一是Rho相关的蛋白激酶(ROCK)。已经识别出两种ROCK亚型:ROCK-I(也称为ROKβ)和ROCK-II(也称为Rho激酶和ROKα)。ROCK通过几种底物的磷酸化介导Rho信号传导并重组肌动蛋白细胞骨架,这些底物有助于肌动蛋白丝的组装和收缩。
ROCK通过苏氨酸残基696处肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(MYPT1)的特异性磷酸化使肌球蛋白磷酸酶失活,这导致20 kDa肌球蛋白轻链(MLC20)的磷酸化形式增加。该苏氨酸残基也可以被强直性肌营养不良症蛋白激酶(DMPK)家族激酶磷酸化。

测试原理:
Millipore’s Rho相关蛋白激酶(ROCK)活性测定试剂盒是一种酶免疫测定法,用于检测活性ROCK和DMPK家族激酶。用重组MYPT1预涂板,其中包含Thr696残基,在添加ROCK-1,ROCK-II或DMPK后可能会被磷酸化。然后使用仅特异性检测Thr696磷酸化MYPT1的检测抗体。随后,加入HRP偶联的二次检测抗体。 通过添加生色底物四甲基联苯胺(TMB)来测量磷酸化底物的量,该底物结合HRP从无色溶液转变为蓝色溶液(或在添加终止溶液后转变为黄色)。450 nm处的吸光度信号反映了样品中ROCK活性的相对量。

ROCK测定试剂盒旨在确定纯化的ROCK活性的存在和相对量,以及用于筛选ROCK或DMPK家族激酶的抑制剂或激活剂。

應用

Millipore’s Rho相关蛋白激酶(ROCK)活性测定试剂盒是一种酶免疫测定法,用于检测活性ROCK和DMPK家族激酶。用重组MYPT1预涂板,其中包含Thr696残基,在添加ROCK-1,ROCK-II或DMPK后可能会被磷酸化。然后使用仅特异性检测Thr696磷酸化MYPT1的检测抗体。随后,加入HRP偶联的二次检测抗体。 通过添加生色底物四甲基联苯胺(TMB)来测量磷酸化底物的量,该底物结合HRP从无色溶液转变为蓝色溶液(或在添加终止溶液后转变为黄色)。450 nm处的吸光度信号反映了样品中ROCK活性的相对量。

ROCK测定试剂盒旨在确定纯化的ROCK活性的存在和相对量,以及用于筛选ROCK或DMPK家族激酶的抑制剂或激活剂。它也可用于评估药理剂对ROCK或DMPK家族激酶的效价。

成分

MYPT1预包被96孔多条板:一个预先包被MYPT1

抗磷酸-MYPT1(Thr696)抗体的96孔多条板:一个小瓶包含10 µg抗磷酸-MYPT1(Thr696)抗体

TMB/E底物:一瓶包含12 mL

终止溶液:一瓶包含12 mL

TBS,20X:一瓶包含50 mL 20X TBS

20% Tween® 20(v/v):一瓶包含3 mL

封板机:两个微孔板包含

分析稀释缓冲液I:一个小瓶包含1 mL

ATP(10mM):一个小瓶包含50 µL

MgCl2(1M):一个小瓶包含100 µL

30% BSA:一个小瓶包含1 mL

山羊抗兔IgG HRP二抗:一个小瓶包含30 µL

ROCK抑制剂Y-27632:一个小瓶包含150 µL

活性Rho相关激酶II(ROCK-II):一个小瓶包含10 µg

儲存和穩定性

在标签和手册上规定的温度下储存试剂盒材料;自接收之日起4个月内使用。

法律資訊

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC

象形圖

CorrosionExclamation mark

訊號詞

Warning

危險聲明

危險分類

Met. Corr. 1 - Skin Sens. 1

儲存類別代碼

8A - Combustible corrosive hazardous materials


分析证书(COA)

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