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过氧化物检测试剂盒

• 别名: Catalase Activity Assay Kit
• 分類程式碼代碼: 41116133
• NACRES: NA.84

属性

• 用途: sufficient for 96 tests
• 品質等級: 100
• 比活性: 0.25 - 4 nmol/min⋅mL
• 包裝: pkg of 1 96-well plate(s)
• 製造商／商標名: Calbiochem^®
• 儲存條件: OK to freeze
• 輸入: sample type cell lysate; sample type tissue homogenate(s); sample type erythrocyte lysate; sample type plasma; sample type serum
• 檢測方法: colorimetric
• 儲存溫度: 2-8°C

说明

一般說明

用于测定血浆、血清、红细胞裂解液、组织匀浆和细胞裂解液中过氧化氢酶（CAT）活性的灵敏分光光度法（540 nm）。测定范围：0.25-4 nmol/min/ml。包含足以进行 96 次测试的试剂。

成分

检测缓冲液、样品缓冲液、甲醛标准液、过氧化氢酶、氢氧化钾、甲醇、过氧化氢、紫红色（显色剂）、高碘酸钾、96 孔板、板盖

警告

毒性：多个毒性值，请参阅MSDS（O）

準備報告

• 1X 检测缓冲液：用 18 ml HPLC 级水稀释 2 ml 10X 检测缓冲液浓缩液。该最终 1X 检测缓冲液（100 mM 磷酸钾，pH 7.0）应用于分析中。当在 4°C 下储存时，这种稀释的 1X 检测缓冲液可稳定保存至少两个月。•1X 样品缓冲液：用 45 ml HPLC 级水稀释 5 ml 10X 样品缓冲液浓缩液。将最终 1X 样品缓冲液（25 mM 磷酸钾，pH 7.5，含 1 mM EDTA 和 0.1％ BSA）应用于稀释甲醛标准品、过氧化氢酶（对照）和样品，然后进行分析。当在 4°C 下储存时，这种稀释的 1X 样品缓冲液可稳定保存至少两个月。•甲醛标准品：该小瓶包含 4.25 M 甲醛。提供的试剂为即用型。•过氧化氢酶（对照）：该小瓶包含牛肝过氧化氢酶（CAT）的冻干粉，并用作阳性对照。通过向小瓶中加入 2 ml 1X 样品缓冲液并充分涡旋来重悬 CAT。取 100 µl 重组酶，并用 1.9 ml 1X 样品缓冲液稀释。稀释酶每孔 20 µl 的等分试样在减去背景吸光度后的吸光度约为 0.29。稀释的酶可稳定保存 30 分钟。重悬的 CAT 在 -20°C 下可稳定保存一个月。•氢氧化钾：小瓶包含氢氧化钾（KOH）沉淀。将小瓶放在冰上，添加 4 ml HPLC 级冷水，涡旋震荡，得到 10 M 溶液。[警告：当氢氧化钾颗粒溶解在水中时会产生热量。如果在 4°C 下保存，该 KOH 溶液至少可以稳定保存三个月。]•过氧化氢：该小瓶包含 8.82 M 过氧化氢溶液。用 9.96 ml HPLC 级水稀释 40 µl 过氧化氢。稀的过氧化氢溶液可稳定保存 2 小时。•Purpald（显色剂）：该小瓶包含 4-氨基-3-肼基-5-巯基-1,2,4-三唑（Purpald）（溶于 0.5 M 盐酸中） 。提供的试剂为即用型。•高碘酸钾：该小瓶包含高碘酸钾（溶于 0.5 M 氢氧化钾溶液）。提供的试剂为即用型。

注意：过热会使过氧化氢酶失活。在样品制备和测定过程中，酶应保持低温。通常，过氧化氢酶在高稀释度下非常不稳定。建议以浓缩液储存样品，在进行检测的 30 分钟内稀释样品。A.组织匀浆1.解剖前，用 pH 7.4 的磷酸盐缓冲盐水（PBS）溶液灌注组织或冲洗组织，以去除任何红细胞和凝块。2.在冰上，将每克组织置于 5-10 ml 冷的缓冲液（即 50 mM 磷酸钾，pH 7.0，含 1 mM EDTA）中进行匀浆。3.在 4°C 下离心，10,000 x g，离心 15 分钟。4.取出上清液进行测定，并保存在冰上。如果不是同一天进行测定，则将样品在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。B.细胞裂解液1.离心收集细胞（即在 4°C 下，1000-2000 x g，离心 10 分钟）。对于贴壁细胞，请勿使用蛋白水解酶进行收获；最好使用橡皮刮子2。在 1-2 ml 冷的缓冲液（即 50 mM 磷酸钾，pH 7.0，含 1 mM EDTA）中在冰上匀浆或超声处理细胞沉淀。3.在 4°C 下离心，10,000 x g，离心 15 分钟。4.取出上清液进行测定，并保存在冰上。如果不是同一天进行测定，则将样品在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。C.血浆和红细胞裂解液1。使用抗凝剂（例如肝素、柠檬酸盐或 EDTA）收集血液。2.在 4°C 下，700-1000 x g，离心血液 10 分钟。在不干扰白色白细胞层的情况下，移去黄色血浆顶层。将血浆保存在冰上直至测定或在 -80°C 下冷冻。该血浆样品可稳定保存至少一个月。3.去除白色淡黄层（白细胞）并丢弃。4.用 4 倍的填充体积的冰冷的 HPLC 级水裂解红细胞（红细胞）。5.在 4°C 下，10,000 x g，离心 15 分钟。6.收集上清液（红细胞裂解液）进行分析并保存在冰上。如果同一天不测定，则在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。D.血清1.不使用抗凝剂（例如肝素、柠檬酸盐或 EDTA）收集血液。在 25°C 下让血液凝结 30 分钟。2.在 4°C 下，2000 x g，离心血液 15 分钟。在不干扰白色淡黄层的情况下，移去黄色的血清顶层。。将血清保存在冰上。如果同一天不测定，则在 -80°C 下冷冻。该样品可稳定保存至少一个月。

儲存和穩定性

自收到之日起，将试剂盒的所有组件储存于 4°C。

分析報告

计算结果a.计算每种标准品和样品的平均吸光度。b.从标准品 A 本身和所有其他标准品和样品中减去标准品 A 的平均吸光度。c.绘制标准品校正后的吸光度（来自上述步骤 2）随表1中甲醛的最终浓度（M）的变化曲线。典型的标准曲线请参见图 1（下图）。<div class="Bio_doc_image">
图2：典型甲醛标准曲线。
</div>d. 将每个样品校正后的吸光值代入标准曲线的线性回归方程，计算出样品中的甲醛浓度。<div class="Bio_doc_image">
图3：甲醛浓度等式</div>
e. 使用以下等式计算样品的过氧化氢酶活性。一个单位定义为在 25°C 下每分钟将导致形成 1.0 nmol 甲醛的酶量。<div class="Bio_doc_image">图 4：活性等式</div>

其他說明

Wheeler, C.R., et al. 1990.Anal.Biochem.184, 193;
Johansson, L.H., et al. 1988.Anal.Biochem.174, 331.

由于该运输中有害物质的性质，您的订单可能需要支付额外的运输费用。某些尺寸的产品可免除其他有害材料的运输费用。请与您当地的销售办事处联系，以获取有关这些费用的更多信息。

法律資訊

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

安全信息

• 象形圖: GHS03,GHS06,GHS08,GHS05
• 訊號詞: Danger
• 危險聲明: H271,H290,H302,H314,H317,H331,H334,H335,H341,H350,H372,H412
• 防範說明: P210 - P273 - P280 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338
• 危險分類: Acute Tox. 3 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - Carc. 1B - Eye Dam. 1 - Met. Corr. 1 - Muta. 2 - Ox. Liq. 1 - Resp. Sens. 1 - Skin Corr. 1A - Skin Sens. 1 - STOT RE 1 - STOT SE 3
• 標靶器官: Respiratory system, Thyroid
• 儲存類別代碼: 5.1A - Strongly oxidizing hazardous materials