Czuła metoda ilościowego oznaczania przeciwciał HIV-1 w próbkach pobranych z błon śluzowych

WEBINAR

Epidemia AIDS jest globalnym wyzwaniem z 38 milionami osób żyjących z HIV i 1,7 milionami nowych zakażeń oraz 690 tysiącami zgonów w 2019 roku. Do tej pory badania kliniczne szczepionek przeciwko HIV-1 nie były skuteczne w wywoływaniu silnych, szeroko neutralizujących odpowiedzi przeciwciał, które mogą zapobiegać infekcjom. Rozważane są alternatywne podejścia, takie jak bierna immunizacja szeroko neutralizującymi przeciwciałami monoklonalnymi, aby pomóc w zapobieganiu nowym zakażeniom HIV. VRC01, silne i szeroko neutralizujące przeciwciało (bNAb) skierowane przeciwko HIV-gp120 CD4bs, które neutralizuje około 91% szczepów HIV-1 z panelu składającego się ze 190 pseudotypowych szczepów wirusa Env przy połowie maksymalnego stężenia hamującego (IC50) wynoszącego 50 ug/ml, jest testowane pod kątem bezpieczeństwa i skuteczności w zapobieganiu zakażeniom HIV. Ponieważ większość transmisji HIV-1 odbywa się drogą śluzówkową, istotne jest ilościowe określenie poziomów biernie podawanego bNAb w próbkach śluzówkowych. Pomaga to określić poziomy bNAb, które zlokalizowały się w miejscach błony śluzowej, zapobiegając infekcji poprzez neutralizację wirusa. Tradycyjne testy ELISA i inne testy immunologiczne z dolną granicą oznaczalności (LLOQ) w zakresie 1 ug/ml nie są wystarczająco czułe, aby dokładnie określić ilościowo niskie poziomy VRC01 w próbkach śluzówkowych. W związku z tym staraliśmy się opracować niestandardowy ultraczuły magnetyczny test immunologiczny oparty na mikrocząsteczkach SMC® (Single Molecule Counting) o ponad 4-logowym liniowym zakresie dynamicznym (LDR) i LLOQ poniżej 120 pg/mL. Z powodzeniem określiliśmy ilościowo poziomy VRC01 w próbkach błony śluzowej odbytnicy, szyjki macicy i jamy ustnej w dwóch badaniach biernej immunizacji przeprowadzonych z VRC01 - VRC 601 i VRC 602. Test był w stanie z powodzeniem określić ilościowo poziomy VRC01 w próbkach błony śluzowej ze wszystkich grup dawkowania z tych badań. Ten dokładny i czuły test immunologiczny może być wykorzystywany w badaniach nad szczepionkami do ilościowego określania niskich poziomów przeciwciał w próbkach śluzówkowych i innych typach próbek w kontekście przedklinicznych i klinicznych badań szczepionek przeciwko HIV-1.