07-473

Anticuerpo anti-trimetil-histona H3 (Lys4)

Upstate^®, from rabbit

• Sinónimos: H3K4me3, Histone H3 (tri methyl K4), H3 histone family, member T, histone 3, H3, histone cluster 3, H3
• UNSPSC Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Propiedades

• biological source: rabbit
• Quality Level: 100
• antibody form: affinity isolated antibody
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• mol wt: (~17 kDa observed; 15.51 kDa calculated.. Uncharacterized bands may be observed in some lysate(s).)
• purified by: affinity chromatography
• species reactivity: human
• species reactivity (predicted by homology): vertebrates (based on 100% sequence homology.)
• manufacturer/tradename: Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable (ChIP-seq); dot blot: suitable; immunocytochemistry: suitable; western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_003493
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: trimethylation (Lys4)
• Gene Information: human ... H3C1(8350)

Descripción

General description

El anticuerpo anti-trimetil-histona H3 (Lys4), Nº de ref. 07-473, es un anticuerpo policlonal de conejo que detecta la histona H3 trimetilada en la lisina 4 y se prueba para utilizar en CHIP, inmunotransferencia por puntos, inmunocitoquímica e inmunoelectrotransferencia.

Purified rabbit polyclonal antibody in buffer containing 0.1 M Tris-Glycine (pH 7.4), 150 mM NaCl with 0.05% sodium azide

Specificity

Este anticuerpo policlonal de conejo detecta específicamente la histona H3 trimetilada en la lisina 4 (H3Kme3).

Immunogen

Epítopo: trimetilada (Lys4)

Péptido lineal conjugado con KLH que corresponde a 10 aminoácidos de la región N-terminal de la histona H3 humana trimetilada en la lisina 4.

Application

Análisis mediante ChIP:
un laboratorio independiente ha demostrado que este anticuerpo actúa en la inmunoprecipitación de cromatina (CHIP).
Análisis mediante inmunotransferencia por puntos: una dilución 1:10 000 de un lote representativo detectó la trimetil-histona H3 (Lys 4 ) en una matriz de especificidad de anticuerpo anti-histona H3 Absurance (Nº de ref. 16-667) y una matriz de especificidad de anticuerpo anti-histona H2A, H2B, H4 Absurance (Nº de ref. 16-665).
Análisis mediante ChIP-seq:
la inmunoprecipitación de la cromatina se realizó usando el kit Magna Chip HiSens (nº de ref. 17-10460), 1 µl de anticuerpo anti-trimetilhistona H3 (Lys4) (nº de ref. 07-473), 20 µl de microesferas de proteína A/G y cromatina de células HeLa 1e6 reticulada seguida de purificación del ADN utilizando microesferas magnéticas. Los bancos se prepararon a partir de muestras de ADN de entrada y ChIP utilizando protocolos estándar con adaptadores con código de barras Illumina y se analizaron en el instrumento Illumina HiSeq. Se cartografió un exceso de dieciocho millones de lecturas de ficheros FastQ utilizando Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) siguiendo la eliminación de etiquetas TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). Los picos se identificaron mediante MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/), y los picos y las lecturas se visualizaron como una pista personalizada en el navegador genómico UCSC (http://genome.ucsc.edu) de archivos Bigwig y BED. El 25 % más alto de los picos identificados en el conjunto de datos 07-473 demostró un solapamiento del 99 % con los picos identificados en la pista de histona ENCODE H3K4me3 BROAD para HeLa S3.

Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear

El anticuerpo anti-trimetil-histona H3 (Lys4), Nº de ref. 07-473, es un anticuerpo policlonal de conejo que detecta la histona H3 trimetilada en la lisina 4 y se ha probado para utilizar en CHIP, inmunotransferencia por puntos, inmunocitoquímica e inmunoelectrotransferencia.

Subcategoría de investigación
Histonas

Quality

Evaluada mediante inmunoelectrotransferencia en preparaciones nucleares HeLa extraídas con ácido (positivo) e histona H3 recombinante (negativo).

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia:
se utilizó una dilución 1:5 000 – 1:10 000 de este anticuerpo para detectar la histona H3 trimetilada (Lys4) en extractos nucleares ácidos de células HeLa.

Target description

La histona H3.1t (UniProt: Q16695; también conocida como H3/t, H3t, H3/g) está codificada por el gen HIST3H3 (también conocido como H3FT) (ID del gen: 8290) en humanos. Las histonas son proteínas nucleares básicas muy conservadas que son responsables de la estructura del nucleosoma de la cromatina en los eucariotas. Desempeñan un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. Dos moléculas de cada una de las cuatro histonas centrales (H2A, H2B, H3 y H4) forman un octámero, alrededor del cual se enrolla el ADN en unidades repetidas, denominadas nucleosomas, lo que limita la accesibilidad al ADN de la maquinaria celular que requiere ADN como plantilla. La histona H3 cuenta con un dominio globular principal y una larga cola N-terminal, que sobresale del centro del nucleosoma globular y puede experimentar varios tipos diferentes de modificaciones epigenéticas que influyen en los procesos celulares. Las colas N-terminales de las proteínas histonas están sujetas a modificaciones postraduccionales, como fosforilación, acetilación y metilación, y reclutan factores reguladores posteriores, influyen en la estructura de la cromatina y son determinantes cruciales de la transcripción. La histona H3 puede experimentar acetilación en varios restos de lisina de la cola de la histona a través de las histona acetiltransferasas. La acetilación se asocia generalmente con la actividad transcripcional y la metilación de los restos de lisina y arginina puede activarse o reprimirse dependiendo del residuo modificado. La trimetilación de la histona H3 es una de las marcas epigenéticas más estudiadas. Se ha comunicado que las modificaciones de H3K4me3 se producen de manera uniforme en los sitios de inicio de la transcripción, y el dominio H3K4me3 se asocia con una mayor actividad transcripcional e identidad celular en el desarrollo previo a la implantación y en el proceso de derivación de las células madre embrionarias de la masa celular interna y las células madre trofoblásticas del trofectodermo. (Ref.: Sharifi-Zarchi, A., et al. (2017). BMS Genomics. 18; Article 964; Liu, X., et al. (2016). Nature. 537(7621); 558-562).

Linkage

Sustituye a: 04-791

Physical form

Anticuerpo policlonal de conejo purificado por afinidad en tampón que contiene Tris-glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150 mM con azida sódica al 0,05 %.

Purificado por afinidad

Storage and Stability

Estable durante 1 año a 2-8ºC desde la fecha de recepción.

Analysis Note

Control
Extractos nucleares de células HeLa

Legal Information

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

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