SDS-PAGE 겔을 위한 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템
3분 안에 바로 사용할 수 있는 SDS-PAGE 겔을 위한 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템에 대해 알아보세요. 필요시에 바로 사용할 수 있는 신선 SDS-PAGE 겔입니다.
SDS-PAGE 겔을 위한 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템
SDS-PAGE용 겔을 어떻게 캐스팅하시나요? 겔 캐스팅은 일반적으로 분리용 겔(resolving gel)과 퇴적용 겔(stacking gel)을 부어서 만드는 것을 포함하며 시간이 많이 소요되는 단계적인 과정입니다. 기존에는 연구자들에게 필요한 겔 캐스팅과 전기영동을 충족시키는 선택지가 매우 적었습니다. 머크의 혁신적인 mPAGE® Lux SDS-PAGE 겔 캐스팅 시스템은 유연한 핸드 캐스팅 겔과 신뢰할 수 있는 프리캐스트 겔을 제공하도록 설계되었습니다. 이는 선택 가능한 대안과 비교하여 품질, 시간, 또는 더 높은 비용 손실이 없는 방식으로 이루어집니다. 머크의 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템을 사용하여 3분 안에 생성된 겔. 겔을 생성할 때 기존 방법의 시간 소모적인 수작업 절차들과 작별을 고할 수 있습니다. 바로 만들어서 사용할 수 있습니다.
정밀한 시스템 제어를 통한 원스텝 광중합(photopolymerization)은 줄어든 준비 단계와 더불어 오류 가능성을 줄입니다. 머크의 mPAGE® Caster는 누수를 방지하고, Bis-Tris 겔을 사용함으로써 핸드 캐스팅한 Tris-Glycine 겔보다 우수한 밴드 품질을 제공합니다. 또한 mPAGE® Lux 시약 키트, mPAGE® TurboMix 시약 키트, mPAGE® 프리캐스트 겔은 모두 Bis-Tris 화학 반응을 사용하고 동일한 running buffer(분리완충액)와 겔 스테인을 공유합니다. 머크의 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템은 APS 또는 TEMED를 사용하지 않으며, 독성 화학물질을 덜 사용하는 보다 안전한 선택지를 제공합니다.
기존의 핸드캐스팅 워크플로
mPAGE® Lux 워크플로
그림 1.기존의 겔 캐스팅 vs mPAGE® Lux 워크플로. mPAGE® Lux 캐스팅 시스템은 기존의 겔 캐스팅 기술에 비해 전반적인 과정이 간소화되고, 중합 시간이 짧으며, 독성 폐기물 발생이 감소합니다. mPAGE® Lux 캐스팅 시스템으로 생성된 겔은 mPAGE® Mini-gel Tank 및 Bio-Rad Mini-PROTEAN Cell과 호환됩니다. 뛰어난 해상도와 실행 시간 단축을 위해, 머크의 mPAGE® 버퍼를 사용하십시오. Lux 겔은 Bis-Tris 호환 가능 버퍼 및 염색 시약과 호환됩니다.
그림 2.mPAGE® Lux Bis-Tris 겔과 핸드 캐스팅한 Tris-Glycine 겔의 데이터 품질 비교. mPAGE® Lux Bis-Tris 겔(왼쪽)과 핸드 캐스팅한 Tris-Glycine 겔(오른쪽)의 밴드 품질. 두 겔 모두 10% acrylamide이며 A431 적정 인간 세포 용해물을 포함하고 있습니다. 전기영동 실행 시간은 200V(Lux 겔)에서 42분, 120V(Tris-Glycine 겔)에서 119분입니다. 겔은 ReadyBlue™ Coomassie 겔 스테인으로 염색됩니다.
mPAGE® Lux 캐스팅 시스템은 겔 캐스팅 과정에 대한 혁신적인 솔루션을 제공합니다. 더 이상 시간 절약과 리소스 절약 중 하나를 포기하지 않으셔도 됩니다. 머크의 새로운 겔 캐스팅 시스템을 통해 연구자들은 프리캐스트 겔 기술의 일부 비용만으로도 필요한 순간에 신속하고 쉽게 겔을 캐스팅할 수 있습니다. mPAGE® Lux 캐스팅 시스템으로 실험실 효율성을 개선하고 겔 전기영동 워크플로를 업그레이드하십시오.
그림 3.습식, 고속, 반건식 웨스턴 블로팅 트랜스퍼 방식 비교. 비교 과정은 12% mPAGE® Lux Bis-Tris 겔을 사용하여 적정 A431 인간 세포 용해물과 Immobilon®-P 멤브레인에 대한 다양한 트랜스퍼 방식으로 진행하였습니다. 멤브레인은 anti-EGFR 및 anti-ErK1/2 항체로 블로팅한 다음 Immobilon® ECL Ultra Western HRP 기질로 검출했습니다. Turbo 방식 = Bio-Rad Trans-Blot® Turbo™ 트랜스퍼 시스템과 Trans-Blot® Turbo™ Transfer Pack을 사용한 트랜스퍼.
그림 4: mPAGE® Lux Bis-Tris 겔의 재현성. A. A341 적정 인간 세포 용해물을 포함하는 8% 겔 네 개가 캐스팅되고 실행되었으며, 이후 ReadyBlue™ Coomassie 겔 스테인으로 염색되었습니다. B. 염색되지 않은 분자량 마커의 상대 이동 거리(Rf)는 각 겔에 대해 계산되었습니다. 각 단백질 밴드에 대한 표준 편차가 표시됩니다.
그림 5.mPAGE® Lux Bis-Tris 시약 유효기간 분석. mPAGE® Lux Bis-Tris 겔은 (A) 0개월, (B) 6개월 또는 (C) 12개월 된 시약을 사용하여 캐스팅합니다. 전개 패턴이나 실행 시간에는 차이가 없습니다.
mPAGE® Lux 캐스팅 시스템 및 Bis-Tris 시약 키트
mPAGE® Lux 캐스팅 시스템을 실험실에 추가로 도입하여 3분 안에 바로 사용할 수 있는 겔을 확보하십시오. 낭비가 적고 실패할 걱정이 없는 고속 겔 캐스팅 제조를 경험해 보세요. 바로 만들어서 사용할 수 있습니다. 머크의 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템 키트는 mPAGE® Lux Curing Station, mPAGE® Lux 믹싱 튜브, mPAGE® Gel Caster, mPAGE® Comb(10웰 및 15웰 포함), mPAGE® Mini Spacer Plate, mPAGE® Lux Masked Short Plate(10웰 및 15웰 포함)로 구성됩니다. 0.75 mm 두께의 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템에는 15웰 comb 및 마스킹된 쇼트 플레이트가 포함되어 있지 않습니다. 키트 설명 및 구성은 다음과 같습니다.
mPAGE® Lux Curing Station
mPAGE® Lux Bis-Tris 시약 키트는 mPAGE® Lux 캐스팅 시스템을 위한 전용 시약 키트입니다. mPAGE® Lux Bis-Tris 시약 키트는 Resolving solution, 희석용액, Stacking solution의 3가지 요소로 구성되어 있습니다. 해당 키트는 8.0~13.5%의 다양한 acrylamide 겔을 지원합니다. mPAGE® Lux 시약 키트의 설명 및 구성은 다음과 같습니다.
mPAGE® Lux SDS-PAGE 겔 캐스트 프로토콜
모든 용액은 중합 방지를 위해 햇빛으로부터 보호되어야 합니다. 겔을 캐스팅하기 전에 모든 용액을 실온에 두십시오.
Resolving Gel
- Resolving Solution과 희석용액을 혼합하여 Resolving Gel Solution을 준비합니다. 혼합 용량은 하단의 표를 참조하십시오. Resolving Gel Solution은 큰 배치로 준비하여 여러 겔을 순차적으로 생성할 수 있습니다.
- 깨끗한 피펫을 사용하여 Resolving Solution을 검은색 믹싱 튜브나 불투명 용기에 추가합니다.
- 깨끗한 피펫을 사용하여 희석용액을 동일한 믹싱 튜브에 추가합니다.
- 용기를 부드럽게 빙글빙글 돌려서 섞습니다. Voltex 믹서를 사용하지 마십시오.
Resolving Gel Solution 용량
단일 1.0 mm 겔을 만들려면 하단의 용량을 사용하십시오. 0.75 mm 및 1.5 mm 용액 용량에 대해서는 SigmaAldrich.com의 제품 페이지에서 전체 사용자 가이드를 참조하십시오.
Stacking Gel
Stacking Solution은 병에서 곧바로 사용할 수 있습니다. 1.0 mm 겔에는 1.5 mL Stacking Solution을 사용하십시오. 중요: Stacking Solution을 희석하지 마십시오.
겔 캐스팅
- 순한 세제로 유리 플레이트를 세척하고 DI water로 헹궈냅니다. 사용하기 전에 70% 에탄올로 닦아내십시오.
- mPAGE® Spacer Plate와 mPAGE® Lux Masked Short Plate를 사용하여 mPAGE® Gel Caster를 조립하고 유리 카세트를 형성합니다. 마스킹된 쇼트 플레이트는 카세트 왼쪽 면의 텍스트를 향하도록 해야 합니다. 캐스터 클램프를 닫기 전에 두 유리 플레이트가 모두 캐스터 프레임 하단에 바르게 놓여 있는지 확인하십시오. 참고: mPAGE® Lux Masked Short Plate는 mPAGE® Curing Station과 함께 사용해야 합니다.
- 전원 버튼을 눌러 mPAGE® Lux Curing Station의 전원을 켭니다. Curing Station이 자체 진단을 시작합니다. 자체 진단을 완료하면 준비 화면이 나타납니다.
- 도어를 열고 겔 캐스터를 Curing Station에 놓은 다음 캐스터를 범퍼 뒤에 맞춥니다.
- 깨끗한 5 mL 피펫을 사용하여 미리 준비된 Resolving Gel Solution을 mPAGE® Gel Caster 프레임에 표시된 채움선까지 추가합니다.
- 깨끗한 5 mL 피펫을 사용하여 쇼트 플레이트 상단까지 Stacking Solution을 천천히 추가합니다.
- mPAGE® 콤을 일정한 각도로 천천히 삽입하여 콤의 뾰족한 부분 아래에 기포가 형성되지 않도록 합니다. 중요: 서로 다른 웰 형식을 혼합하는 경우, 웰이 잘못 형성될 수 있습니다. 사용:
- 웰이 10개인 mPAGE® Lux Masked Short Plate가 포함된 10웰 콤(comb)
- 웰이 15개인 mPAGE® Lux Masked Short Plate가 포함된 15웰 콤(comb)
- 용액을 흘린 곳에서 불완전한 경화가 발생하는 것을 방지하기 위해 쇼트 플레이트 전면에 흘린 용액을 닦아냅니다.
- Curing Station의 도어를 닫고 겔 두께를 선택합니다.
- 시작을 눌러 겔 경화를 시작합니다. 팁: 여러 겔을 캐스팅하는 경우 첫 번째 겔이 경화되는 동안 두 번째 Gel Caster로 겔 캐스팅 공정을 시작하십시오.
- 경화 작업이 완료되면 도어를 열고 Gel Caster를 제거합니다. 장력 클립을 아래로 내려 캐스터 프레임을 풀고, Gel Caster에서 카세트를 제거합니다. 그런 다음 프레임 측면을 열고 상단에서부터 카세트를 밀어냅니다.
- 겔을 즉시 사용하거나, 젖은 페이퍼 타월로 카세트를 감싸고 지퍼 탑(zip top) 백이나 밀폐 용기 안에 평평하게 눕힌 채로 2~8°C에서 최대 2주 동안 보관하십시오. 겔이 마르므로 카세트를 미포장 상태로 두지 마십시오.
전기영동 후 겔을 제거하는 방법
겔 스크레이퍼를 사용하여 유리 카세트에서 겔을 제거합니다. 겔이 찢어지지 않도록 겔 가장자리(오른쪽)를 따라 자릅니다. mPAGE® Lux Bis-Tris 겔은 MOPS-SDS 또는 MES-SDS running buffer에만 사용해야 합니다. Bis-Tris 겔은 Tris-Glycine running buffer와 호환되지 않습니다.
mPAGE® Lux 겔 캐스팅 시스템을 사용한 지속 가능한 겔 캐스팅
머크는 고객들이 폐기물 및 화학적 위해요소의 부담을 줄이면서 단백질 분리 연구를 완료할 수 있도록 친환경적인 워크플로 솔루션을 제공하기 위해 노력하고 있습니다. 머크의 mPAGE® Lux 겔 캐스팅 시스템은 겔당 생성되는 일회용 플라스틱 폐기물의 양을 최대 26% 줄이고, 기존의 핸드 캐스트 워크플로에 비해 겔 생성에 필요한 시간을 줄이고 절차를 간소화합니다. 또한 mPAGE® Lux 시스템은 광개시제(photo-initiator)를 사용하여 TEMED 및 APS를 포함한 유해시약을 대체하므로 이러한 시약에 대한 노출 및 관련 폐기물을 관리할 필요가 없습니다. 머크의 mPAGE® Lux 시스템의 효과적인 시간 절약 및 환경적 이점에 대해 알아보면서, 더 지속 가능한 미래를 향해 함께 노력해보세요.
계속 읽으시려면 로그인하거나 계정을 생성하세요.
계정이 없으십니까?