단백질 전기영동 겔 염료
단백질이 전기영동으로 분리된 후에는 일반적으로 겔 염료를 사용하여 단백질 밴드를 시각화합니다. 단백질 겔 염료는 염료 결합 또는 색상 생성 화학 반응을 이용하여 단백질과 선택적으로 반응하여 염색된 겔을 얻습니다. 단백질 겔 염료는 일반적으로 초기 시료 크기, 원하는 검출 방법 및 다운스트림 분석과의 호환 요구 사항에 따라 선택됩니다.
고정 용액
단백질 전기영동 후에는 일반적으로 단백질들이 염색 전에 겔 안에서 "고정"되어 단백질들이 퍼지는 것을 방지합니다. 일부 겔 염료에는 염색 전에 겔을 고정할 필요가 없게 하는 화학물질이 포함되어 있습니다.
컬러메트릭 단백질 겔 염료
- 쿠마시(Coomassie) Brilliant Blue는 단단백질 아미노 그룹과 카복실 그룹과의 정전기 상호작용을 통해 폴리아크릴아마이드 겔 상에 단백질을 염색하는 데 사용됩니다.
- ReadyBlue™ 단백질 겔 염료는 폴리아크릴아마이드 겔용으로 빠르고 감도 높은 콜로이달 쿠마시 염료로, 바로 사용 가능한 용액으로 제공되어 더 빠르고 간소화된 프로토콜을 가능하게 합니다. ReadyBlue™는 컬러메트릭 또는 IR 형광법을 통해 이미지화할 수 있습니다. 이러한 안전한 제제는 유기 용제 또는 인산을 포함하지 않으며 최대 3번까지 재사용할 수 있습니다. ReadyBlue™로 2 ng 단위의 밴드까지의 감도를 입증하였습니다.
- EZBlue™ Gel Staining Reagent는 편리하고 민감하며 안전한 Coomassie Brilliant Blue G-250 콜로이드 단백질 염료로 단백질 전기영동 결과를 개선하고 염색 시간을 크게 줄여줍니다. 콜로이드 염료로서, 겔 자체가 아닌 단백질에만 반응합니다. 배경 염색이 감소되어, 폴리아크릴아미드 겔 및 PVDF 멤브레인에서 단백질 밴드를 거의 즉시 시각화할 수 있습니다. 디스테이닝 단계가 필요하지 않지만, 물 세척을 하면 밴드를 강화하고 배경을 명확하게 할 수 있습니다. EZBlue™ 시약은 극도로 민감하여, 단백질 최소 5ng도 감지할 수 있습니다.
- Reversible Protein Detection Kit는 쿠마시 염색과 유사한 검출 감도로 나일론, 니트로셀룰로오스, PVDF 멤브레인 또는 PAGE겔의 단백질 염색을 위해 설계된 고유한 검출 시스템입니다. 다른 대부분의 염료들은 나일론 막과 강한 전하 상호작용으로 인해 높은 배경을 생성합니다. 염색은 EDTA 용액으로 쉽게 되돌릴 수 있으므로 블롯을 웨스턴 블롯팅 또는 아미노산 서열 분석을 위해 재사용할 수 있습니다.
- Naphthol 블루 블랙 염료는 폴리아크릴아미드겔, 아가로스겔 및 니트로셀룰로오스 멤브레인 상에서 단백질을 염색하도록 사용할 수 있습니다. 전기영동 후, 겔 안의 단백질을 고정하는 것이 권장됩니다. 해당 겔을 7%(v/v) 아세트산에 용해된 0.1% 나프톨 블루 블랙으로 2시간 이상 염색하고 7%(v/v) 아세트산 용액으로 탈색합니다. 검출 감도는 쿠마시 블루의 약 20%입니다.
- 최고의 감도를 제공하는 ProteoSilver™ Silver Stain Kit는 3분 ~ 12분의 배양 시간으로 밴드 당 ≥0.1ng의 단백질 감도를 제공합니다. 이러한 염료는 극소량의 단백질에 추천하며 MALDI-TOF 애플리케이션과 호환됩니다.
형광 단백질 겔 염료
- EZFluor™ 1단계 Fluorescent Protein Gel Stain은 고정 없이 5분 ~ 30분의 단일 염색 단계만 필요로 하는 바로 사용 가능한 형광 단백질 겔 염색이며 밴드 당 단백질 최소 약 1ng ~ 10ng을 검출할 수 있습니다. 염색은 질량 분석법 및 에드만(Edman) 기반 서열분석과 완벽하게 호환됩니다.
- EZFluor™ UV 1단계 형광 단백질 겔 염료는 UV 투과 광원 및 에티듐 브로마이드 필터를 사용하여 이미징하기 위해 설계된 바로 사용 가능한 단백질 겔 염료로서, 질량 분석과 호환됩니다.
- SYPRO® Ruby 단백질 겔 염료는 폴리아크릴아미드겔 전기영동법(PAGE)에 의해 분리된 단백질 검출을 위한 바로 사용 가능한 초고감도 형광성 염료입니다. 이러한 염료는 2D PAGE에서 사용하도록 특별히 설계되었으며, 1D PAGE 및 등전 집중화(IEF) 겔에도 탁월한 선택임이 증명되었습니다. SYPRO® Ruby 단백질 겔 염료는 많은 은 염색 기술에 필적하는 감도를 얻습니다.
- SYPRO® Orange는 SYPRO® Red와 유사하지만, 다소 더 밝고 배경 형광성이 약간 높습니다. 이 염료는 UV 또는 광대역 조명에 의해 효율적으로 자극됩니다. 이 염료는 블롯이나 등전초점(IEF) 겔 상의 단백질 염색에 적합하지 않으며, 2-D 겔 상의 단백질 염색 시 감도가 감소합니다.
디스테이닝 시약
- CoZap은 쿠마시 블루 염료를 신속하게 제거하는 데 사용됩니다. 고유한 CoZap 패드는 직접 디스테이닝 트레이에 배치되며 용액 내의 모든 유리 염료를 흡수하여 디스테이닝 용액을 교체할 필요가 없습니다.
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