X-tremeGENE™トランスフェクション試薬に関する比較ガイド

X-tremeGENE^TM HP、X-tremeGENE^TM 9、X-tremeGENE^TM 360トランスフェクション試薬

細胞のトランスフェクションを成功させる可能性は、細胞型、プロトコル、トランスフェクション試薬の組成によって大きく異なります。X-tremeGENE™トランスフェクション試薬は、DNA、small DNA、CRISPR/Cas9成分などの多様な分子を有する一般的かつトランスフェクションが困難な細胞を効率的にトランスフェクションするよう設計されています。

新しい製品：X-tremeGENE™ 360トランスフェクション試薬は、トランスフェクションが困難な細胞型や一般的な細胞型にsiRNA/miRNA、プラスミドDNA、CRISPR/Cas9成分を送達するための、高性能で多目的かつ信頼性の高いソリューションです。詳細はsigmaaldrich.com/xtg360roを参照してください。

• 効率と最適化
• 重点的なアプリケーションの表
• 細胞型特有の製品の推奨

NR：推奨なし

	X-tremeGENE™ HP DNAトランスフェクション試薬	X-tremeGENE™ 9 DNAトランスフェクション試薬	X-tremeGENE™ 360トランスフェクション試薬
DNAのトランスフェクション	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
siRNA/miRNAおよびCRISPR/Cas9成分のトランスフェクション	NR	NR	✓ ✓ ✓
標準的な細胞株（例：COS-7、HEK-293、HeLa、NIH 3T3、CHO-K1）による効率	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
「トランスフェクション困難な」細胞（例：HT 29、HCT 116、K-562細胞）による効率	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
初代細胞のトランスフェクション	✓ ✓	NR	✓ ✓ ✓
試薬の穏やかさ	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
使用のしやすさ（最適化が最小限）	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
トランスフェクション後の細胞毒性	きわめて低い	低い	きわめて低い

重点的なアプリケーション	X-tremeGENE™ HP DNAトランスフェクション試薬	X-tremeGENE™ 9 DNAトランスフェクション試薬	X-tremeGENE™ 360トランスフェクション試薬	X-tremeGENE™ siRNAトランスフェクション試薬
細胞プロセスの機能試験	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
定量的タンパク質発現	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓	－
siRNAを用いた遺伝子ノックダウン試験	－	－	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓

図1. X-tremeGENE™ HP試薬によるヒト初代線維芽細胞の効率的なトランスフェクション。

初代線維芽細胞をヒト包皮から単離し、4 μLのX-tremeGENE^™HP試薬と1 μgのGFPコードプラスミドDNAを6ウェル細胞培養プレートでトランスフェクションしました。トランスフェクションから48時間後にGFPの発現状態を可視化しました。左側の図はGFPの蛍光を示し、右側の図は対応する明視野イメージを示しています。

図2. ヒト間葉系幹細胞において、X-tremeGENE™ HP試薬およびX-tremeGENE™ 9試薬は競合試薬を上回る性能。

ヒト間葉系幹細胞を、4名のドナーの骨髄吸引生検から分離しました。X-tremeGENE^™ HP試薬（XHP）、X-tremeGENE^™ 9試薬（X9）、および競合薬（LTX）を用いて、指定の比率で細胞をトランスフェクションしました（試薬［μL］：GFPをコードするプラスミドDNA［μg］。比率2：1は、X-tremeGENE^™ 9試薬を使用して試験していません）。トランスフェクションしていない細胞を対照（陰性）として用いました。トランスフェクションの48時間後にFACS解析を実施しました。

図3. X-tremeGENE™ HP DNAトランスフェクション試薬は、トランスフェクション困難な細胞型において競合試薬を上回る性能。

図4. X-tremeGENETM 360は、A549細胞で試験されたLipofectamine試薬を上回る性能。X-tremeGENETM 360、Lipofectamine^® 2000（Thermo Fisher Scientific）、Lipofectamine^® 3000（Thermo Fisher Scientific）を用いて、A549細胞にルシフェラーゼをコードするプラスミドDNAを、指定の試薬/DNA比で24時間トランスフェクションした。トランスフェクションは、従来のアッセイ法を用いてルシフェラーゼ活性により測定した。細胞毒性は、細胞のみと比較して、損傷細胞のサイトゾルからのLDH放出を定量することによって評価した。X-tremeGENETM 360を最適な比率でトランスフェクションした細胞では、Lipofectamine^® 2000またはLipofectamine^® 3000をトランスフェクションした細胞と比較して、導入遺伝子発現量が高く、細胞毒性が低かった。

X-tremeGENE^™ HP試薬（XHP）および競合試薬（LTXおよびL2K）を用いて、指定された比率（試薬［μL］：GFPをコードするプラスミドDNA［μg］）で細胞をトランスフェクションしました。トランスフェクション効率は、GFP蛍光顕微鏡を用いて可視化しました。

細胞型特有の製品の推奨

NR：推奨なし

株化細胞株	X-tremeGENE™ HP DNAトランスフェクション試薬	X-tremeGENE™ 9 DNAトランスフェクション試薬	X-tremeGENE™ 360トランスフェクション試薬
CHO-K1	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
COS-7	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
NIH-3T3	✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
HeLa	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
HEK-293	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
Hep-G2	✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
HT1080	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓
HT29	✓	NR	✓ ✓
PC-3	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
K-562	✓ ✓ ✓	NR	✓ ✓ ✓
U-2 OS	✓	NR	✓
MCF-7	✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
RAW	✓	NR	✓ ✓
HCT 116	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
Jurkat	✓	NR	✓
PC-12	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓
初代細胞
ヒト初代線維芽細胞	✓ ✓	NR	✓ ✓
MEF	✓ ✓	NR	✓ ✓
幹細胞
ヒト間葉系幹細胞	✓ ✓	NR	✓ ✓
マウス間葉系幹細胞（E14TG2a）	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓
昆虫細胞株
High Five	✓ ✓	NR	✓ ✓
SF9	✓ ✓	NR	✓ ✓

注記：上記のデータは、GFPをコードするpcDNA3.1プラスミドまたはルシフェラーゼをコードするpCIプラスミドのいずれかを、サイトメガロウイルス（CMV）プロモーターとともに用いて得られたものです。これらの推奨は実験結果に基づくガイドラインです。最適な試薬:DNA比率は、経験的に決定しなければなりません。

 

アプリケーションの表

X-tremeGENE™はRocheの商標です。ライフサイエンス研究のみを目的としており、診断手順として使用できません。

重点的なアプリケーション	推奨製品	特長
がん研究 機能的細胞解析（遺伝子調節、タンパク質相互作用の研究、経路解析など）のための一般的ながん研究用細胞株のトランスフェクション。 標的評価 標的評価のための一般的細胞株のトランスフェクション。	X-tremeGENE™ HP DNAトランスフェクション試薬 X-tremeGENE™ 9 DNAトランスフェクション試薬 X-tremeGENE™ 360トランスフェクション試薬	低い細胞毒性 最小限の試薬によるオフターゲット効果 簡単なメソッド 幅広い細胞型に対する適用可能性 低い細胞密度で高いトランスフェクション効率 最大100%血清で活性あり
トランスフェクションが困難な細胞および初代細胞 機能的細胞解析のための初代細胞および「トランスフェクションが困難な」細胞株のトランスフェクション。 タンパク質発現分析 分析またはタンパク質発現定量のためのトランスフェクション。	X-tremeGENE™ HP DNAトランスフェクション試薬 X-tremeGENE™ 360トランスフェクション試薬	高いタンパク質発現量 簡単なメソッド 迅速なプロトコル 高いトランスフェクション効率 血清含有培地において活性あり 合成可能；ヒトまたは動物由来成分フリー
siRNAトランスフェクションを用いた遺伝子ノックダウン	X-tremeGENE™ siRNAトランスフェクション試薬 X-tremeGENE™ 360トランスフェクション試薬	低い細胞毒性 高いノックダウン効率 幅広い細胞型に対する適用可能性 血清含有培地において活性あり

効率・最適化 

試薬選択、DNA/RNA:トランスフェクション試薬比率、プロトコル／メソッドなどの最適化が、どうしてトランスフェクション効率の重要な決定因子であるのかをご覧ください。