レムデシビルおよびその他の抗ウイルス剤のLC-MS/MS分析

はじめに

レムデシビルは広域スペクトル抗ウイルス剤で、通常は注射で投与されます。本剤は、2020年にWHOの連帯臨床試験を通じて、COVID-19の治療薬として試験されています。ここでは、レムデシビルと構造が類似な3つの抗ウイルス剤類に使用可能な、高速で頑健なHPLC-MS/MS法を紹介します。インジナビル、ネルフィナビル、サキナビルはプロテアーゼ阻害剤で、通常、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）の治療に使用されます。

標的分析物の選択性を最大限に高めるため、開発プロセスを通じて、いくつかの異なる固定相をスクリーニングしました。その総合的な結果として、RP-Amideカラムで最も良い結果が得られましたが、C18、AQ-C18、Phenyl-Hexyl相でもレムデシビルに適した保持力とピーク形状が得られます。30 x 2.1 mmの短いAscentis^® Express RP-Amide固定相をグラジエントモードで使用した場合、2分以内にすべての化合物を良好に保持し、完全に分離することができます。レムデシビル（1～250 ng/mL）のキャリブレーションデータは十分な直線性（R2 = 0.9995）を示し、検出限界（LOD）と定量限界（LOQ）はそれぞれ0.7と1.3 ng/mL（95%信頼区間）と判定されます。

図1. レムデシビル、C27H35N6O8P（CAS No. 1809249-37-3）

図2. ネルフィナビル、C32H45N3O4S（CAS No. 159989-64-7）

図4. サキナビル、C38H50N6O5（CAS No. 127779-20-8）

図3. インジナビル、C36H47N5O4（CAS No. 150378-17-9）

実験条件
カラム	Ascentis® Express RP-Amide（2.0 µm）2.1 x 30 mm
検出方法	ESI（+）、MRM（603.2/402.2 m/z；603.2/200 m/z）
移動相A	0.01 % ギ酸／水
移動相B	アセトニトリル
グラジエント	0分（97% A）；0.2分（97%）；1.7分（66%）；1.75分（0%）；3.0分（0%）；停止（2分平衡化）
サンプル希釈液	水／アセトニトリル（50/50, v/v）
標準溶液	1～250 ng/mL レムデシビル（8点検量線）
注入量	2 µL
流速	0.8 mL／分
カラム温度	40 ℃

時間（分）	移動相A（%）	移動相B（%）
0.00～0.20	97	3
1.70	66	34
1.75～3.00	0	100
3.05～5.00	97	3

番号	化合物	保持時間（分）	RRT	テーリング係数
1	インジナビル	1.14	0.75	1.44
2	サキナビル	1.33	0.87	1.38
3	ネルフィナビル	1.37	0.90	1.38
4	レムデシビル	1.53	1.00	1.44

レムデシビルのキャリブレーションデータ（1～250 ng/mL）

図5. インジナビル、サキナビル、ネルフィナビル、レムデシビルの分離を示すクロマトグラム。レムデシビルおよび関連する3種抗ウイルス剤のベースライン分離を示すクロマトグラムの例

図6. 1 ng/mLのレムデシビル標準溶液を注入した際のクロマトグラム。1 ng/mLの標準溶液を注入した際のLC-MSクロマトグラムの例

図7. レムデシビルの検量線データ（1～15 ng/mL）。低濃度のレムデシビルにおける検量線とその直線性

図8. レムデシビルの検量線データ（1～250 ng/mL）。検討した濃度範囲における検量線

化合物	LOD /ng/mL	LOQ /ng/mL
レムデシビル	0.7	1.3