Coloranti per gel elettroforetici di proteine

Risorse sui prodotti

Articolo: Elettroforesi - Reagenti per la colorazione delle proteine
Protocollo: Protein Blotting Handbook
Brochure: Western Blotting Workflow

Soluzioni di fissaggio

Dopo l'elettroforesi su gel, le proteine vengono fissate per evitare che si disperdano​prima della colorazione. Alcune colorazioni contengono già delle sostanze chimiche che eliminano la necessità di fissare i gel prima della colorazione.

Colorazioni colorimetriche per gel di proteine

• Il blu di Coomassie (o Brilliant Blue) colora le proteine dei gel di poliacrilammide interagendo con i loro gruppi amminici e carbossilici.
• Il colorante per gel di proteine ReadyBlue™ consiste una colorazione rapida e sensibile di Coomassie colloidale per gel di poliacrilammide ed è fornita come soluzione pronta all'uso, per un protocollo più rapido e semplice. ReadyBlue™ può essere acquisito tramite metodi colorimetrici o fluorescenza a IR. Ha una formulazione sicura che non contiene solventi organici o acido fosforico e può essere riutilizzato fino a 3 volte. E’ stato dimostrato che ReadyBlue™ riesce a rilevare fino a 2 ng di proteine per banda.
• Il colorante per proteine InstantBlue™è una soluzione colorante pronta all'uso appositamente formulata per il rilevamento rapido, sensibile e sicuro delle proteine. Con InstantBlue™ i gel di proteine possono essere colorati in pochi minuti, senza la necessità di lavare, fissare o decolorare. InstantBlue™ non è tossico e non contiene metanolo.
• Il reagente per la colorazione di gel EZBlue™è un colorante blue di Coomassie (Coomassie blue G250) per proteine conveniente, sensibile e sicuro che migliora i risultati dell'elettroforesi delle proteine riducendo significativamente il tempo di colorazione. Essendo un colorante in stato colloidale reagisce solamente con le proteine e non con il gel. Il background molto basso consente una visualizzazione quasi immediata su gel di poliacrilammide e membrane in PVDF. Non è necessaria alcuna fase di decolorazione, sebbene un lavaggio con acqua aiuta ad intensificare le bande e a schiarire il background. Il reagente EZBlue™ è estremamente sensibile e rileva piccoli quantitativi di proteine, fino a 5 ng.
• Il Reversible Protein Detection Kit colora le proteine su membrane di nylon, nitrocellulosa e PVDF o gel PAGE, con una sensibilità di rilevamento simile a quella della colorazione con Coomassie. La maggior parte delle altre colorazioni su membrana di nailon comportano un background elevato dovuto a forti interazioni delle cariche con la membrana. La colorazione è reversibile usando una soluzione di EDTA, in modo che il blot possa essere riutilizzato per Western blotting o per l'analisi della sequenza amminoacidica.
• Il colorante amido nero (naphthol blue back) può essere utilizzato per colorare le proteine su gel di poliacrilammide, gel di agarosio e membrane di nitrocellulosa. Dopo l'elettroforesi, si consiglia il fissaggio delle proteine. Il gel va quindi colorato con amido nero 0,1% in acido acetico al 7% (v/v) per almeno 2 ore e decolorato con una soluzione di acido acetico al 7% (v/v). La sensibilità di rilevamento è circa il 20% di quella del Blue di Coomassie
• Il kit per colorazione argentica ProteoSilver™ ha una sensibilità pari a ≥0,1 ng di proteine per banda con un tempo di incubazione di 3-12 minuti. Questa colorazione è consigliata per proteine​a bassissima abbondanza ed è compatibile con le applicazioni MALDI-TOF.

Colorazione fluorescente di gel di proteine

• Il colorante Fluorescente per gel di proteine EZFluor™ 1-step è un colorante pronto all'uso che richiede una singola fase di colorazione di 5-30 minuti, non richiede fissazione e consente di rivelare fino a 1-10 ng di proteine per banda. La colorazione è completamente compatibile con la spettrometria di massa e il sequenziamento secondo la procedura di Edman.
• Il colorante Fluorescente per gel di proteine EZFluor™ è un colorante pronto all'uso progettato per l'imaging utilizzando un transilluminatore UV e un filtro per etidio bromuro ed è compatibile con la spettrometria di massa.
• Il colorante per gel di proteine SYPRO^® Ruby è un colorante fluorescente pronto all'uso ultrasensibile per la rivelazione di proteine separate mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide (PAGE). Questo colorante, progettato appositamente per l'uso in 2-D PAGE, ha dimostrato di essere una scelta eccellente anche per 1-D PAGE e per gel IEF (focalizzazione isoelettrica). Il colorante per gel di proteine SYPRO^® Ruby raggiunge una sensibilità paragonabile a quella delle colorazioni argentiche.
• SYPRO^® Orange è simile a SYPRO^® Red, sebbene sia leggermente più luminoso e dia una fluorescenza di fondo leggermente maggiore. Il colorante viene eccitato in modo efficiente con un illuminazione a UV o a banda larga. Non è adatto per la colorazione di proteine su blot o su gel IEF e ha sensibilità ridotta nella colorazione di proteine su gel 2-D.

Reagenti decoloranti

• CoZap viene utilizzato per la rimozione rapida della colorazione con blu di Coomasie. L'esclusivo assorbente CoZap viene posizionato direttamente nel vassoio di decolorazione dove assorbe tutto il colorante libero in soluzione, eliminando la necessità di cambiare la soluzione decolorante.