D5025

Desossiribonucleasi I

Type IV, lyophilized powder, ≥2,000 Kunitz units/mg protein

• Sinonimo/i: DNasi I, Desossi-ribonucleato 5′-oligonucleotido-idrolasi
• Numero CAS: 9003-98-9
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-667-0
• Numero MDL: MFCD00130918
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Proprietà

• Origine biologica: bovine pancreas
• Livello qualitativo: 300
• Tipo: Type IV
• Forma fisica: lyophilized powder
• Attività specifica: ≥2,000 Kunitz units/mg protein
• PM: ~31 kDa
• Purificato mediante: chromatography
• Composizione: Protein, ≥80%
• tecniche: DNA purification: suitable
• Solubilità: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear, colorless
• Compatibilità: suitable for molecular biology
• applicazioni: diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• Attività estranea: Chymotrypsin ≤0.5%; Protease ≤0.05%; RNase ≤0.02%
• Condizioni di spedizione: wet ice
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Applicazioni

Desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stato impiegata in uno studio per investigare l′analisi bidimensionale di zimogrammi delle nucleasi in Bacillus subtilis. Desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata in uno studio per investigare gli effetti di farmaci che si legano ai solchi maggiori e minori e intercalatori nella associazione al DNA di proteine legate al solco minore RecA e desossiribonucleasi I.

La DNasi I è usata per tagliare il DNA come primo stadio dell′incorporazione di basi marcate nel DNA. L′enzima Sigma è stato utilizzato per trattare tessuto cerebrale di ratto. Questo studio ha dimostrato che la crescita degli assoni sugli astrociti non è inibita dagli oligodendrociti. In un altro studio, campioni fissati e scongelati di E. coli sono stati digeriti con DNasi Sigma insieme ad altri enzimi. La digestione è stata condotta prima della permeabilizzazione e colorazione degli acidi nucleici.

Usato per rimuovere DNA da campioni di proteine.

Azioni biochim/fisiol

La DNasi I è un′endonucleasi che agisce sui legami fosfodiesterici adiacenti alle pirimidine per produrre polinucleotidi con fosfati 5′-terminali. In presenza di Mg²⁺, la DNasi taglia ciascun filamento di DNA indipendentemente e i siti di clivaggio sono casuali. Invece, in presenza di Mn²⁺ i due filamenti di DNA vengono tagliati approssimativamente alla stessa altezza. Il pH ottimale è fra 7 e 8. I cationi bivalenti come Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺, e Zn²⁺ sono attivatori dell′enzima. Una concentrazione di Ca²⁺ 5 mM stabilizza l′enzima contro la digestione proteolitica. La DNasi I da pancreas bovino consiste di quattro componenti, A, B, C, e D, distinguibili cromatograficamente, i primi tre in rapporto molare 4:1:1. La forma D è presente solo in piccola quantità. 2-Mercaptoetanolo, chelanti, sodio dodecilsolfato (SDS) e actina sono noti inibitori dell′attività enzimatica.

Definizione di unità

Un′unità Kunitz produrrà un aumento di ΔA₂₆₀ di 0,001 per minuto per mL a pH 5,0 a 25 °C, usando DNA tipo I o III come substrato.

Stato fisico

Polvere liofilizzata, contenente cloruro di calcio

Nota sulla preparazione

Una soluzione di DNAsi I 10 mg/mL in NaCl 0,15 M può perdere <10% della sua attività quando conservata per una settimana in aliquote a −20 °C. Le stesse soluzioni conservate a 2-8 °C possono perdere circa il 20% dell′attività. Rimane attiva fino a cinque ore a 60 °C a pH fra 5 e 7 e perde la sua attività in <10 minuti a 68 °C. L′attività decade del 6% all′ora in tampone acetato (a pH 5,0) e tris (a pH 7,2) alla concentrazione di 1 mg/mL.

Risultati analitici

Proteina determinata da biureto.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H334
• Consigli di prudenza: P261 - P284 - P501
• Classi di pericolo: Resp. Sens. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 3
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable