UDGHL-RO

Uracil-DNA glicosilasi, termolabile

recombinant from marine bacterium BMTU 3346

• Sinonimo/i: PCR, UDG
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.2.2.15 (BRENDA, IUBMB)
• Codice UNSPSC: 41106300

Proprietà

• Origine biologica: bacterial (marine bacterium BMTU 3346)
• Livello qualitativo: 100
• Ricombinante: expressed in E. coli
• Stato: solution
• Confezionamento: pkg of 100 U (11775367001); pkg of 500 U (11775375001)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• Concentrazione: 1000 U/mL
• tecniche: activity assay: suitable
• Colore: colorless
• pH ottimale: 8.3-8.9
• Solubilità: water: soluble
• Compatibilità: suitable for enzyme test
• applicazioni: life science and biopharma
• Attività estranea: DNA decontamination:, present ( >= 10 e5 copies ); RNases with MS- II- RNA ≤10 units, none detected; Unspec.nucleases w. lambda-DNA 20 units, none detected; Unspec.nucleases w.M13mp9ss-DNA ≤20 units, none detected; Unspec.nucleases w.pBR 322-DNA ≤20 units, none detected
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

L′uracil-DNA glicosilasi termolabile contiene l′enzima omonimo presente nel batterio marino BMTU 3346. Analogamente alla UNG di E. coli, idrolizza i legami uracil-glicosidici in DNA a singolo o doppio filamento, staccando l′uracile e creando siti abasici sensibili agli alcali nel DNA. Tali siti abasici possono essere idrolizzati dall′endonucleasi, dal calore o dal trattamento con alcali. A seconda delle modalità di preparazione del DNA, l′uracil-DNA glicosilasi può essere utilizzata per ottenere una scissione dell′U-DNA di tipo generale o specifico per un sito o un filamento. Questo enzima presenta una minore termostabilità e pertanto può essere inattivato più facilmente.

Caratteristiche dell′enzima
L′enzima di BMTU 3346 viene inattivato più velocemente (2 minuti a +95 °C) dell′enzima corrispondente di E. coli (10 minuti a +95 °C). È stato inoltre riferito che l′UNG di E. coli rimane parzialmente attiva determinando la degradazione del prodotto della PCR contenente dU. Al contrario, la UNG termolabile non degrada i prodotti della PCR contenenti dU prima di almeno qualche ora di incubazione a un temperatura compresa tra +2 e +8 °C. Pertanto, non è necessario congelare il prodotto della PCR subito dopo l′amplificazione o conservare la miscela di reazione a -70 °C.

Specificità

• L′uracil-DNA glicosilasi idrolizza i legami uracil-glicosidici nei siti dell′U-DNA in DNA a singolo e doppio filamento, staccando l′uracile e creando siti abasici sensibili agli alcali nel DNA.
• L′enzima è attivo sul DNA a singolo e doppio filamento.
• L′uracil-DNA glicosilasi è inattiva sull′RNA e del DNA nativo privo di uracile.
• Poiché l′uracil-DNA glicosilasi non presenta requisiti relativi agli ioni metallici, è pienamente attiva in presenza di EDTA.

Inattivazione termica: 95 °C per 2 minuti

Applicazioni

L′uracil-DNA glicosilasi può essere utilizzata per scindere il DNA in qualsiasi sito in cui sia stato incorporato un residuo di deossiuridilato. A causa della termolabilità dell′uracil-DNA glicosilasi, la principale applicazione di questo enzima consiste nella prevenzione della contaminazione da carry-over nella PCR. A differenza dell′enzima di E. coli, l′utilizzo di questa preparazione di UNG non richiede il congelamento del prodotto della PCR subito dopo l′amplificazione o la conservazione della miscela di reazione a +70 °C.

Nota importante: per tecniche ultrasensibili come la PCR in tempo reale, consigliamo la nostra uracil-DNA glicosilasi LightCycler^® che è ottimizzata per questa applicazione.

Caratteristiche e vantaggi

• Prevenzione della contaminazione da carry-over nella PCR.
• Aumento dell′efficienza delle procedure di mutagenesi dirette a un sito.
• Marcatura delle sonde oligonucleotidiche.
• Inattivazione più rapida rispetto all′enzima corrispondente di E. coli a causa della minore termostabilità dell′enzima.
• Nessuna degradazione dei prodotti della PCR con dU prima di alcune ore di incubazione a una temperatura compresa tra +2 e +8 °C.

Contenuto
L′enzima viene fornito come soluzione 1 U/μl in tampone di conservazione.

Qualità

Test funzionale: L′attività di prevenzione del carry-over viene testata aggiungendo circa 105 dU contenenti templati prima della reazione di amplificazione. Dopo il trattamento con UNG, non si rilevano prodotti di amplificazione.
L′enzima non contiene esonucleasi o endonucleasi contaminanti ed è privo di attività delle RNasi secondo le procedure di controllo di qualità attuali.

Definizione di unità

Un′unità è definita come la quantità di uracil-DNA glicosilasi richiesta per degradare completamente 1 μg di DNA contenente uracile a singolo filamento purificato (batteriofago M13, cresciuto in E. coli CJ236 dut-ung-) a +37 °C in 60 minuti.
Un′unità di Lindahl è definita come la quantità di enzima necessaria per rilasciare 1 mol di uracile a +37 °C in un minuto. Un′unità di Lindahl è comparabile a 520.000 unità secondo la nostra definizione di unità.

Attività specifica: 1 U/μL

Altre note

Per uso generale di laboratorio.

Note legali

LightCycler is a registered trademark of Roche

Informazioni sulla sicurezza

• Indicazioni di pericolo: H412
• Consigli di prudenza: P273 - P501
• Classi di pericolo: Aquatic Chronic 3
• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 2
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash