(ELISA) Saggio di immunoadsorbimento enzimatico
Tipicamente condotti in piastre da microtitolazione, i saggi ELISA vengono comunemente usati in biologia molecolare per la rivelazione e quantificazione di vari tipi di molecole fra cui peptidi, proteine e anticorpi. Questi saggi sono in grado di rivelare le molecole di interesse a livello di pg/mL e sono fondamentali per applicazioni sia di ricerca di base che di ricerca in campo medico
Saggi ELISA: interazioni antigene-anticorpo
I componenti molecolari fondamentali di un saggio ELISA includono tipicamente un anticorpo coniugato con un enzima, una molecola di interesse immobilizzata e un substrato di rivelazione. Un aspetto critico nel determinare il successo di un saggio ELISA e la qualità dei dati ottenuti è dato dall’affinità e dalla specificità delle interazioni antigene-anticorpo. Le interazioni antigene-anticorpo sono influenzate da numerosi fattori, inclusi pH, temperatura e forza ionica.
Metodi di rivelazione nei saggi ELISA
I metodi ELISA diretti prevedono un antigene immobilizzato, legato alla superficie di una piastra direttamente o indirettamente tramite un anticorpo di cattura, seguito da un anticorpo primario specifico per l’antigene e coniugato con un enzima e, infine, dal substrato di rivelazione. Il metodo di rivelazione indiretto più comunemente impiegato comprende sia un anticorpo primario non coniugato che un anticorpo secondario coniugato, specifico per la rivelazione dell’anticorpo primario. La rivelazione indiretta ha il vantaggio di una maggiore immunoreattività con l’antigene bersaglio perché l’enzima coniugato è presente solo sull’anticorpo secondario. Oltre ai metodi diretti e indiretti, l’ELISA a cattura (sandwich) fa uso di un ulteriore anticorpo cattura-antigene inizialmente attaccato alla superficie della micropiastra, seguito da due anticorpi, uno primario e uno secondario coniugato a un enzima con modalità simili al metodo indiretto precedentemente descritto.
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