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一般說明
使用RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）测定法评估RipAb+抗体。 每个RIPAb+抗体组均包含阴性对照抗体，以确保RIP反应的特异性，并确认了与目标免疫沉淀RNA结合蛋白特异性相关的RNA的共免疫沉淀。在适当的情况下，RIPAb+组还包括定量RT-PCR对照引物（RIP引物），通过成功共沉淀特定的RNA靶标（例如信使RNA）来生物学验证IP结果。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在实验环境中使用抗体时验证RIP方案。如果未提供靶标特异性测定法，则使用基于自动微流体的测定法通过在对照免疫沉淀上富集可检测的RNA来验证RIPAb+试剂盒。
AGO1（真核翻译起始因子2C 1）是argonaute家族的成员。它包含一个PAZ和一个PIWI域，是G1阻滞和响应氮饥饿而交配所必需的。它也可能通过调节胞质分裂来促进细胞周期控制。Ago1也是产生影响miRNA定向RNA切割的成熟miRNA所必需的，因此对于异染色质形成和准确的染色体分离很重要。
AGO1（真核翻译起始因子2C 1）是argonaute家族的成员。它包含一个PAZ和一个PIWI域，是G1阻滞和响应氮饥饿而交配所必需的。它也可能通过调节胞质分裂来促进细胞周期控制。Ago1也是产生影响miRNA定向RNA切割的成熟miRNA所必需的，因此对于异染色质形成和准确的染色体分离很重要。
特異性
独立实验室已证明该抗体不与Ago2、Ago3或Ago4发生交叉反应（Azuma-Mukai A et al. (2008) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 105: 7964-7969）。
免疫原
标记GST的重组蛋白，对应于人Ago1
應用
RNA结合蛋白免疫沉淀（microRNA）：
代表性批次数据。
使用5 µg正常小鼠IgG（目录号CS200621）或抗Ago1抗体（目录号CS207365）和Magna RIP RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒（目录号17-700）对从293细胞制备的RIP裂解液（每个IP 2 X 107个细胞当量）进行免疫沉淀。
通过TaqMan microRNA分析，hsa-miR-15a验证了与Ago 1相关的microRNA的成功免疫沉淀。（图2）。有关实验详细信息，请参阅Magna RIP（目录号17-700）或EZ-Magna RIP（目录号17-701）方案。
蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
用抗Ago 1，克隆4G7-E12（0.1 µg/mL）探测HeLa细胞裂解液。使用与HRP偶联的山羊抗小鼠IgG二抗和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化。
箭头表示Ago 1（~97 kDa）。
代表性批次数据。
使用5 µg正常小鼠IgG（目录号CS200621）或抗Ago1抗体（目录号CS207365）和Magna RIP RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒（目录号17-700）对从293细胞制备的RIP裂解液（每个IP 2 X 107个细胞当量）进行免疫沉淀。
通过TaqMan microRNA分析，hsa-miR-15a验证了与Ago 1相关的microRNA的成功免疫沉淀。（图2）。有关实验详细信息，请参阅Magna RIP（目录号17-700）或EZ-Magna RIP（目录号17-701）方案。
蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
用抗Ago 1，克隆4G7-E12（0.1 µg/mL）探测HeLa细胞裂解液。使用与HRP偶联的山羊抗小鼠IgG二抗和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化。
箭头表示Ago 1（~97 kDa）。
研究子类别
RNA结合蛋白（RBP）
RNA结合蛋白（RBP）
研究类别
表观遗传学&核功能
表观遗传学&核功能
经RIPAb+ Ago1 -RIP验证的抗体&引物组方便地包括抗体 & 特异性对照PCR引物。
包裝
每组10次测定。推荐用于：每个RIP约5 µg抗体（取决于生物学背景）。
品質
RNA结合蛋白免疫沉淀：
代表性批次数据
使用5 µg正常小鼠IgG或5 µg抗Ago1抗体和Magna RIP® RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒（目录号17-700），对从293细胞制备的RIP裂解液（每个IP 2 X 10E7细胞当量）进行免疫沉淀。
使用RIP引物IGF2通过qPCR验证Argonaute 1相关RNA的成功免疫沉淀（图1）。
有关实验详细信息，请参阅Magna RIP（目录号17-700）或EZ-Magna RIP（目录号17-701）方案。
代表性批次数据
使用5 µg正常小鼠IgG或5 µg抗Ago1抗体和Magna RIP® RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒（目录号17-700），对从293细胞制备的RIP裂解液（每个IP 2 X 10E7细胞当量）进行免疫沉淀。
使用RIP引物IGF2通过qPCR验证Argonaute 1相关RNA的成功免疫沉淀（图1）。
有关实验详细信息，请参阅Magna RIP（目录号17-700）或EZ-Magna RIP（目录号17-701）方案。
標靶描述
~97 kDa
外觀
形式：纯化
抗-Ago 1（小鼠单克隆）。含有50 µg蛋白g纯化单克隆抗体的小瓶，溶于含有0.1 M Tris-甘氨酸（pH 7.4），150 mM NaCl，0.05%叠氮化钠的缓冲液中，然后添加甘油至30%。在-20°C下储存。
浓度：0.7 mg/mL
正常小鼠IgG。包含125 µg纯化小鼠IgG的小瓶，溶于125 µL含有0.1%叠氮化钠的储存缓冲液。 在-20°C下储存。
RIP引物IGF2。 一个小瓶，包含75 μL 5 μM人IGF2 mRNA特异性引物。在-20°C下储存。
对于：GCG GCT TCT ACT TCA GCA G
REV: CAG GTG TCA TAT TGG AAG AAC
浓度：0.7 mg/mL
正常小鼠IgG。包含125 µg纯化小鼠IgG的小瓶，溶于125 µL含有0.1%叠氮化钠的储存缓冲液。 在-20°C下储存。
RIP引物IGF2。 一个小瓶，包含75 μL 5 μM人IGF2 mRNA特异性引物。在-20°C下储存。
对于：GCG GCT TCT ACT TCA GCA G
REV: CAG GTG TCA TAT TGG AAG AAC
蛋白G纯化
儲存和穩定性
自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于 -20°C。避免反复冻融，其可能会破坏IgG并影响产品性能。
注意：冷藏室温度变化至低于-20°C时可能导致含甘油的溶液在储存过程中冻结。
注意：冷藏室温度变化至低于-20°C时可能导致含甘油的溶液在储存过程中冻结。
分析報告
对照
包括正常小鼠IgG和人IGF2 mRNA的特异性引物。
包括正常小鼠IgG和人IGF2 mRNA的特异性引物。
其他說明
浓度：请参考批次特异性浓缩物的分析证书。
法律資訊
MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
免責聲明
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10-13 - German Storage Class 10 to 13
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