T4799

Tripsina from porcine pancreas

lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, 1,000-2,000 BAEE units/mg solid

• Sinónimos: Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• Número de CAS: 9002-07-7
• Comisión internacional de enzimas: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-650-8
• Número MDL: MFCD00082094
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Propiedades

• origen biológico: Porcine pancreas
• Nivel de calidad: 200
• Línea del producto: BioReagent
• formulario: lyophilized powder
• actividad específica: 1,000-2,000 BAEE units/mg solid
• mol peso: 23.8 kDa
• concentración: 25 mg/mL
• técnicas: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• pH: 7.6
• Condiciones de envío: ambient
• temp. de almacenamiento: −20°C

Descripción

Descripción general

La tripsina puede utilizarse para la desagregación tisular, debido a su acción efectiva y su tolerancia hacia diferentes tipos de células y neutralización inducida por suero.

Aplicación

La tripsina del páncreas porcino se ha utilizado para digerir huesos de pollo. También se ha utilizado en el aislamiento de las células del endotelio luteínico.

Para la digestión de los péptidos con tripsina, utilice una proporción de aproximadamente 1:100 a 1:20 de tripsina:péptido. La utilización habitual de este producto es la separación de las células adherentes de una superficie de cultivo. La concentración necesaria de tripsina para separar las células de su sustrato depende fundamentalmente del tipo de célula y de la edad del cultivo. También se han utilizado tripsinas para la re-suspensión de células durante el cultivo celular, en investigación en proteómica para la digestión de proteínas y en varias digestiones en gel†. Otras aplicaciones son la evaluación de la cristalización mediante técnicas de membrana y en un estudio para determinar que las tasas de plegado y los rendimientos de las proteínas pueden limitarse por la presencia de trampas cinéticas.

Acciones bioquímicas o fisiológicas

La tripsina rompe los péptidos por el lado C-terminal de los restos de lisina y de arginina. La velocidad de hidrólisis de esta reacción se reduce si a cada lado del punto de rotura hay un residuo ácido, y la hidrólisis se interrumpe si en el lado carboxilo del sitio de ruptura hay un resto de prolina. El pH óptimo de actividad de la tripsina es 7-9. La tripsina también puede actuar rompiendo las uniones éster y amida de los derivados sintéticos de aminoácidos. Se añade EDTA a las disoluciones de tripsina como agente quelante que neutraliza los iones de calcio y de magnesio, los cuales ocultan los enlaces peptídicos sobre los que actúa la tripsina. La eliminación de esos iones aumenta la actividad enzimática.

Los inhibidores de las proteasas de serina, como DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF y la aprotinina, entre otros, inhibirán la tripsina.

Componentes

La tripsina consiste en una sola cadena polipeptídica de 223 restos de aminoácidos, producida por la eliminación del hexapéptido N-terminal del tripsinógeno, que es hidrolizado en el enlace peptídico entre Lys e Ile. La secuencia de aminoácidos está entrecruzada por 6 puentes disulfuro. Esta es la forma nativa de la tripsina, la beta-tripsina. La BETA-tripsina puede autolisarse, rompiendo en el resto Lys - Ser, para producir alfa-tripsina. La tripsina es miembro de la familia de proteasas de serina.

Precaución

Las disoluciones en HCl 1 mM son estables durante 1 año en alícuotas y conservadas a -20°C. La presencia de Ca²⁺ también reducirá la autólisis de la tripsina y mantendrá su estabilidad en disolución. La tripsina retendrá también la mayor parte de su actividad en urea 2,0 M, HCl de guanidina 2,0 M o SDS al 0,1 % (p/v).

Definición de unidad

Una unidad BAEE producirá una ΔA₂₅₃ de 0,001 por min a pH 7,6 y 25°C utilizando BAEE como sustrato. Una unidad BTEE = 320 unidades ATEE. Volumen de reacción = 3,2 ml (trayectoria de la luz 1 cm).

Nota de preparación

Este producto es un polvo liofilizado soluble en disolución salina equilibrada de Hank a 25 mg/ml.
Para aplicaciones que requieran EDTA, la solubilización de la tripsina debe realizarse con una disolución salina tamponada que no contenga Ca²⁺ ni Mg²⁺.

Información de seguridad

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palabra de señalización: Danger
• Frases de peligro: H315,H319,H334,H335
• Consejos de prudencia: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Clasificaciones de peligro: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órganos de actuación: Respiratory system
• Código de clase de almacenamiento: 11 - Combustible Solids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 1
• Equipo de protección personal: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves