BGALA-RO

ββ-Glucuronidasa/arilsulfatasa

from Helix pomatia

• Sinónimos: arilsulfatasa/β-glucuronidasa, sulfatasa/β-glucuronidasa
• Código UNSPSC: 12352204

Propiedades

• origen biológico: animal (Helix pomatia)
• Nivel de calidad: 100
• formulario: solution
• actividad específica: 10.8 U/mL, 25 °C (ß-Glucuronidase); 25 U/mL, 25 °C (with 4-NP-sulfate, Arylsulfatase)
• envase: pkg of 10 mL (10127698001); pkg of 2 mL (10127060001)
• fabricante / nombre comercial: Roche
• técnicas: ELISA: suitable
• color: colorless to brown
• pH óptimo: 4.5-5.0
• solubilidad: water: miscible
• aplicaciones: life science and biopharma; sample preparation
• temp. de almacenamiento: 2-8°C

Descripción

Descripción general

βLa β-glucuronidasa/arilsulfatasa de Helix pomatiais es la preparación enzimática más utilizada que contiene actividad sulfatasa y una especificidad muy amplia. Es una mezcla cruda de enzimas cuya preparación no implica ningún tipo de separación cromatográfica. Esta preparación contiene actividad glucuronidasa y sulfatasa. La hidrólisis enzimática previa a la detección es esencial para conseguir una elevada sensibilidad durante el análisis. Después de la hidrólisis, la muestra puede analizarse mediante espectroscopia de masas, cromatografía de gases, HPLC o inmunoanálisis. Para análisis de dopaje, la actividad sulfatasa junto con la actividad glucuronidasa son esenciales para la detección de todos los conjugados con medicamentos presentes en la muestra. βLa β-glucuronidasa/arilsulfatasa se utiliza también para la hidrólisis enzimática de los glucurónidos y los ésteres de sulfato en los líquidos biológicos, y en la orina principalmente.

Especificidad

βLa β-glucuronidasa/arilsulfatasa muestra una amplia especificidad para muchas clases de β-glucurónidos y ésteres de sulfato.

Especificidad de la β-glucuronidasa:
Los glucósidos que forma el ácido β-D-glucurónico con una variedad de compuestos que contienen grupos hidroxilo se hidrolizarán fácilmente en presencia de β-glucuronidasa.

• Dichos compuestos son esteroides como el estriol (K_m = 0,42 mM, pH 4,5), la androsterona, el pregnanediol, la tetrahidrocortisona,
• fenoles como la fenolftaleína (K_m = 0,39 mM), el 4-nitro-fenol, la 4-metilumbeliferona,
• medicamentos como el cloranfenicol y los tetrahidrocannabinoles,
• y metabolitos como la tiroxina y la bilirrubina.

Polisacáridos que contienen restos del ácido β-glucurónico, como el ácido hialurónico, también son hidrolizados.
βLa β-glucuronidasa es muy específica de la parte carbohidrato: no se hidrolizan ni los α-glucósidos ni los ácidos β-glucosidurónicos. Sin embargo, la naturaleza del residuo unido al resto de ácido β-glucurónico apenas es importante en absoluto.

Actividad específica: 5,5 U/ml a +38°C con fenolftaleín-β-glucurónido como sustrato (4,5 U/ml a +25°C con 4-nitro-fenil-β-D-glucurónido como sustrato = 100 000 unidades Fishman/ml a +38°C con fenolftaleín-β-glucurónido como sustrato). 1 unidad Fishman libera 1 μg de fenolftaleína del fenolftaleín-β-glucurónido en 1 hora a +38°C.

Especificidad de la arilsulfatasa:
Los ésteres de sulfato de muchos fenoles se hidrolizan en presencia de arilsulfatasa. Ejemplos son los sulfatos de esteroide como la estronasulfato, el hidrógenosulfato de 4-nitrofenilo (K_m = 1,8 mM, pH 7,3), el 4-nitro-pirocatecol 2-sulfato (K_m = 1,25 mM, pH 7,5) y el disulfato de fenolftaleína.

Actividad específica: 2,6 U/ml a +38°C con disulfato de fenolftaleína como sustrato (14 U/ml a +25°C con 4-nitrofenil sulfato como sustrato = 800 000 unidades Roy/ml a +38°C con 2-hidroxi-5-nitrofenil sulfato como sustrato). 1 unidad Roy libera 1 μg de 2-hidroxi-5-nitrofenil sulfato en 1 hora a +38°C.

Especificidad de la β-glucuronidasa:
Los glucósidos que forma el ácido β-D-glucurónico con una variedad de compuestos que contienen grupos hidroxilo se hidrolizarán fácilmente en presencia de β-glucuronidasa.

• Dichos compuestos son esteroides como el estriol (K_m = 0,42 mM, pH 4,5), la androsterona, el pregnanediol, la tetrahidrocortisona,
• fenoles como la fenolftaleína (K_m = 0,39 mM), el 4-nitro-fenol, la 4-metilumbeliferona,
• medicamentos como el cloranfenicol y los tetrahidrocannabinoles,
• y metabolitos como la tiroxina y la bilirrubina.

Polisacáridos que contienen restos del ácido β-glucurónico, como el ácido hialurónico, también son hidrolizados.
βLa β-glucuronidasa es muy específica de la parte carbohidrato: no se hidrolizan ni los α-glucósidos ni los ácidos β-glucosidurónicos. Sin embargo, la naturaleza del residuo unido al resto de ácido β-glucurónico apenas es importante en absoluto.

Especificidad de la arilsulfatasa:
Los ésteres de sulfato de muchos fenoles se hidrolizan en presencia de arilsulfatasa. Ejemplos son los sulfatos de esteroide como la estronasulfato, el hidrógenosulfato de 4-nitrofenilo (K_m = 1,8 mM, pH 7,3), el 4-nitro-pirocatecol 2-sulfato (K_m = 1,25 mM, pH 7,5) y el disulfato de fenolftaleína.

Aplicación

βLa β-glucuronidasa o la arilsulfatasa se han utilizado ampliamente en investigación y en laboratorios analíticos para la hidrólisis enzimática simultánea de los β-glucurónidos de esteroide y los ésteres de sulfato. La enzima se utiliza durante la preparación de la muestra para escindir los glucurónidos y los ésteres de sulfato antes de la GC-MS, la HPLC, los inmunoanálisis u otros métodos analíticos, entre ellos análisis de dopaje e hidrólisis de conjugados de esteroides (glucurónidos) y ésteres de sulfato en orina y otros líquidos corporales.

Características y beneficios

• Desconjugar y detectar glucurónidos y ésteres de sulfato.
• Cribado rápido de esteroides, benzodiacepinas, cannabinoides, opioides y otros medicamentos.

Componentes

EC 3.1.6.1 & 3.2.1.31

Principio

La glucuronidación es uno de los principios básicos del metabolismo. Muchas de las sustancias presentadas al cuerpo humano experimentan un procesamiento metabólico consistente en la conjugación con ácido glucurónico mediante las UDP-glucuronosiltransferasas (UGT). Estas enzimas catalizan la transferencia de un grupo glucuronil a muchas moléculas endógenas y exógenas biológica y farmacológicamente activas. El glucurónido es, en general, más soluble, menos tóxico y excretado con mayor facilidad por el organismo humano que la molécula original.
Además, puede producirse la sulfatación del medicamento o la sustancia química por sulfotransferasas en el cuerpo humano. La sulfatación en general es menos predecible que la glucuronidación ya que existen muchas isoenzimas de las sulfotransferasas, y hay diferencias individuales en la proporción de glucuronidación frente a sulfatación de la sustancia.

Definición de unidad

Glucuronidasa:
Unidad estándar
La unidad estándar de actividad β-glucuronidasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación del 4-nitrofenol a partir del ácido 4-nitrofenil β-D-glucosidurónico a una temperatura de +25 ºC y un pH de 4,5 por 1 μM.
Unidad fenolftaleína
La unidad fenolftaleína de la actividad β-glucuronidasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación de fenolftaleína a partir de ácido fenolftaleín β-D-glucosidurónico a una temperatura de +38 ºC por 1 μM.
Aproximadamente 4,5 unidades estándar equivalen a 5,5 unidades fenolftaleína.
Unidad Fishman
La unidad Fishman de actividad β-glucuronidasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación de la fenolftaleína a partir de ácido fenolftaleín β-D-glucosidurónico a una temperatura de +38 ºC por 1 μg.
Aproximadamente 1 unidad estándar equivale a 22.000 unidad Fishman (1 unidad fenolftaleína es equivalente a 19.000 unidades Fishman).
Arilsulfatasa:
Unidad estándar
La unidad estándar de actividad arilsulfatasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación del 4-nitrofenol a partir del 4-nitrofenil sulfato a una temperatura de +25 ºC y un pH de 6,2 por 1 μM.
Unidad fenolftaleína
La unidad fenolftaleína de la actividad arilsulfatasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación de fenolftaleína a partir del disulfato de fenolftaleína a una temperatura de +38 ºC y un pH de 6,2 por 1 μM.
Aproximadamente 5,4 unidades estándar equivalen a 1 unidad fenolftaleína.
Unidad Roy
La unidad Roy de actividad arilsulfatasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación de 4-nitropirocatecol a partir del hidrógenosulfato de 2-hidroxi 5-nitrofenilo (4-nitropirocatecol 2-sulfato) a una temperatura de +38 ºC y un pH de 6,2 por 1 μg.
Aproximadamente 1 unidad estándar equivale a 57 000 unidades Roy (1 unidad fenolftaleína es equivalente a 308 000 unidades Roy).

Forma física

Disolución en solución salina estabilizada

Nota de preparación

Concentración de trabajo: En muchas aplicaciones, el producto puede diluirse con agua inmediatamente antes de ser utilizado o puede emplearse sin diluir.
Nota: La presente preparación de β-glucuronidasa/arilsulfatasa está muy concentrada y debe diluirse para algunas aplicaciones. Además, en la preparación de protoplastos, debe encontrarse empíricamente la concentración precisa que utilizar para una cepa determinada de levadura.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): Nota: proporciones alícuotas de la preparación diluida pueden conservarse entre -15 y -25 °C; no deben descongelarse y volverse a congelar más de una o dos veces, y la conservación a temperaturas más bajas no alarga su vida más allá de la del producto conservado entre 2 y 8 °C.

Almacenamiento y estabilidad

Evite la congelación y descongelación repetidas (más de 2 veces).

Otras notas

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.

Información de seguridad

• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): nwg
• Punto de inflamabilidad (°F): No data available
• Punto de inflamabilidad (°C): No data available