11684795910
Roche
Kit de detección de muerte celular in situ, fluoresceína
sufficient for ≤50 tests, suitable for detection
Sinónimos:
Fluoresceína-12-UTP sal de tetralitio, Fluoresceína-5(6)-carboxamidocaproil-(5-[3-aminoalil]uridina 5′-trifosfato)
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About This Item
Código UNSPSC:
12352200
Productos recomendados
uso
sufficient for ≤50 tests
Nivel de calidad
fabricante / nombre comercial
Roche
técnicas
flow cytometry: suitable
aplicaciones
detection
temp. de almacenamiento
−20°C
Descripción general
Kit para detección y cuantificación de la apoptosis al nivel celular basado en el marcaje de las roturas de la hebra de ADN (tecnología TUNEL); análisis mediante microscopia de fluorescencia o citometría de flujo.
Los métodos habitualmente utilizados para determinar la apoptosis consisten en el análisis del ADN genómico mediante electroforesis en gel de agarosa y los ensayos de fragmentación del ADN basados en la 3H-timidina y, alternativamente, la 5-bromo-2′-desoxiuridina. Los métodos consisten en separación de ADN fragmentado de bajo peso molecular del ADN no fragmentado de elevado peso molecular en una población celular dada. Por tanto, estos métodos no proporcionan información sobre el destino de una célula concreta de una población celular dada o, en particular, en cortes de tejido. Por otro lado, las células apoptóticas individuales pueden ser reconocidas microscópicamente por el aspecto característico de la condensación y la fragmentación de la cromatina nuclear, pero este método es subjetivo y está limitado a un margen temporal relativamente estrecho cuando los cambios morfológicos están en su máximo.
El signo patognomónico de la apoptosis es la degradación del ADN, que en las primeras etapas es selectiva para las regiones conectoras internucleosómicas del ADN. La escisión del ADN puede producir roturas (muescas) monocatenarias o bicatenarias del ADN. Ambos tipos de roturas pueden detectarse marcando los extremos 3′-OH terminales libres con nucleótidos modificados (por ejemplo, biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) en una reacción enzimática. La enzima dexosinucleotidil transferasa terminal (TdT) cataliza la polimerización independiente de molde de los desoxirribonucleótidos al extremo 3′ del ADN monocatenario o bicatenario. Este método se ha denominado también TUNEL (del inglés TdT-mediated dUTP-X nick end labeling: marcaje del extremo de la muesca con dUTP-X mediado por la TdT). También pueden marcarse los grupos 3′-OH libres utilizando ADN polimerasas mediante el mecanismo dependiente de molde denominado traducción de muesca. Sin embargo, se considera que el método TUNEL es más sensible y rápido.
El signo patognomónico de la apoptosis es la degradación del ADN, que en las primeras etapas es selectiva para las regiones conectoras internucleosómicas del ADN. La escisión del ADN puede producir roturas (muescas) monocatenarias o bicatenarias del ADN. Ambos tipos de roturas pueden detectarse marcando los extremos 3′-OH terminales libres con nucleótidos modificados (por ejemplo, biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) en una reacción enzimática. La enzima dexosinucleotidil transferasa terminal (TdT) cataliza la polimerización independiente de molde de los desoxirribonucleótidos al extremo 3′ del ADN monocatenario o bicatenario. Este método se ha denominado también TUNEL (del inglés TdT-mediated dUTP-X nick end labeling: marcaje del extremo de la muesca con dUTP-X mediado por la TdT). También pueden marcarse los grupos 3′-OH libres utilizando ADN polimerasas mediante el mecanismo dependiente de molde denominado traducción de muesca. Sin embargo, se considera que el método TUNEL es más sensible y rápido.
Especificidad
La reacción del método TUNEL marca de preferencia las roturas de la hebra de ADN generadas durante la apoptosis. Esto permite discriminar entre apoptosis y necrosis, y entre roturas de la hebra de ADN principal inducidas por citostáticos o irradiación.
Aplicación
El kit de detección de muerte celular in situ, fluoresceína, es una técnica no radiactiva precisa, rápida y sencilla para detectar y cuantificar la muerte celular apoptótica al nivel celular mediante microscopia de fluorescencia y detección cuantitativa mediante citometría de flujo en las células y los tejidos. Por tanto, el kit de detección de muerte celular in situ puede utilizarse en muchos sistemas de análisis diferentes.
Son ejemplos:
Son ejemplos:
- Detección de células apoptóticas individuales en cortes de tejido congelados y fijados en formalina en investigación básica
- Determinación de la sensibilidad de las células cancerosas a la apoptosis inducida por fármacos en la investigación del cáncer
- Tipado de las células que experimentan muerte celular en poblaciones heterogéneas mediante procedimientos de tinción doble
Características y beneficios
- Sensibilidad: el procedimiento de marcaje directo utilizando fluoresceína-dUTP reduce el marcaje de fondo
- Rapidez: el uso de fluoresceína-dUTP permite el análisis de las muestras directamente después de la reacción TUNEL
- Comodidad: no se precisa un sistema de detección secundario
- Precisión: Identificación de la apoptosis a un nivel molecular (roturas en la hebra de ADN) e identificación de las células en las primerísimas etapas de la apoptosis
Envase
1 kit que contiene 2 componentes.
Nota de preparación
Disolución de trabajo: Añadir el volumen total (50 μl) de la disolución enzimática a los 450 μl remanentes de la disolución de marcaje para obtener 500 μl de la mezcla de reacción TUNEL.
Mezclar bien para equilibrar los componentes.
Mezclar bien para equilibrar los componentes.
Otras notas
Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.
Solo componentes del kit
Referencia del producto
Descripción
- Enzyme Solution (TdT)
- Label Solution (fluorescein-dUTP)
Palabra de señalización
Danger
Frases de peligro
Consejos de prudencia
Clasificaciones de peligro
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
Código de clase de almacenamiento
6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 3
Punto de inflamabilidad (°F)
does not flash
Punto de inflamabilidad (°C)
does not flash
Certificados de análisis (COA)
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Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
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