HTS020M
Receptor de cannabinoides CB2 recombinante humano Preparación de membrana ChemiSCREEN
Human CB2 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.
Sinónimos:
Cannabinoid receptor membrane prep, Human CB2 membrane prep
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About This Item
Código UNSPSC:
41106514
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.41
Productos recomendados
origen biológico
human
Nivel de calidad
recombinante
expressed in CHO cells
fabricante / nombre comercial
ChemiScreen
Chemicon®
técnicas
ligand binding assay: suitable (GTPγS)
radioligand binding assay (RLBA): suitable
Nº de acceso NCBI
Nº de acceso UniProt
Condiciones de envío
dry ice
Descripción general
CB2 humano de longitud completa
Los compuestos cannabinoides incluyen drogas exógenas como el D9-THC, el principal componente psicoactivo de la planta Cannabis sativa, y mediadores endógenos, como la anandamida, que pertenecen a la familia de los eicosanoides. Los efectos biológicos de los cannabinoides están mediados por una familia de dos receptores transmembrana 7 acoplados a Gi, el CB1 y el CB2. El receptor CB1 se encuentra principalmente en el cerebro e interviene en los efectos psicoactivos de los ligandos cannabinoides. El receptor CB2 se expresa principalmente en las células inmunitarias, como los mastocitos y las células B activadas por CD40, donde interviene en la proliferación y la inhibición de la migración (Howlett et al., 2002). La activación del CB2 inhibe el desarrollo de fibrosis hepática (Julien et al., 2005). En el hueso, el CB2 se expresa tanto en osteoblastos como en osteoclastos, y su función es evitar la pérdida ósea (Ofek et al., 2006). Además, la activación del CB2 tiene un efecto antinociceptivo en modelos animales de dolor neuropático, inflamatorio y agudo; este efecto está mediado por la liberación de opioides endógenos a la periferia (Ibrahim et al., 2005). Las preparaciones de membrana con CB2 de Millipore son preparaciones de membrana crudas obtenidas a partir de nuestras líneas celulares recombinantes estables con un elevado nivel de expresión de superficie de GPCR; por lo tanto, son herramientas de HTS (cribado de alto rendimiento) ideales para el cribado de agonistas y antagonistas del CB2. Los preparados de membrana presentan una Kd de 2,7 nM para [3H]-CP55,940. Con 5 μg/pocillo de una preparación de membrana con CB2 y [3H]-CP55,940 2,5 nM, se obtiene una relación señal-fondo superior a 10 veces.
Calidad
Tabla 1. Valores de señal:fondo y de unión específica obtenidos en un ensayo de unión competitiva con cantidades variables de preparación de membrana con CB2.
ESPECIFICACIONES: 1 unidad = 5 μg de preparación de membrana
Bmáx: 50 pmol/mg
Kd: 2,7 nM
| 10 µg/pocillo | 5 µg/pocillo | |
|---|---|---|
| Señal: fondo | 33,5 | 25,2 |
| Unión específica (cpm) | 7336 | 6207 |
ESPECIFICACIONES: 1 unidad = 5 μg de preparación de membrana
Bmáx: 50 pmol/mg
Kd: 2,7 nM
Especificaciones
Condiciones de incubación
CONDICIONES DE ENSAYO RECOMENDADAS: Las membranas se mezclan con un ligando radiactivo y un competidor no marcado (en las figuras 1 y 2 encontrará las concentraciones probadas) en tampón de unión en una placa no ligante de 96 pocillos y es incuban durante 1-2 horas. Antes de la filtración, una placa de recolección de 96 pocillos FC (Millipore nº de ref. MAHF C1H) se recubre con polietilenimina al 0,33 % durante 30 min, y luego se lava con HEPES 50 mM, pH 7,4, BSA al 0,5 %. La reacción de fijación se transfiere a la placa de filtración y se lava 3 veces (1 ml por pocillo por lavado) con tampón de lavado. La placa se seca y se cuenta.
Tampón de unión: Hepes 50 mM, pH 7.4, MgCl2 5 mM, CaCl2 1 mM, BSA al 0,2 % filtrado y conservado a 4°C.
Radioligando: [3H]-CP55940 (Perkin Elmer #NET1051)
Tapón de lavado: Hepes 50 mM, pH 7,4, NaCl 500 mM, BSA al 0,1 %, filtrado y conservado a 4°C.
Un envase contiene suficientes membranas para al menos 200 ensayos (unidades), donde una unidad es la cantidad de membrana que producirá más de 10 veces la señal:fondo con CP55,940 2,5 nM marcado con 3H
CONDICIONES DE ENSAYO RECOMENDADAS: Las membranas se mezclan con un ligando radiactivo y un competidor no marcado (en las figuras 1 y 2 encontrará las concentraciones probadas) en tampón de unión en una placa no ligante de 96 pocillos y es incuban durante 1-2 horas. Antes de la filtración, una placa de recolección de 96 pocillos FC (Millipore nº de ref. MAHF C1H) se recubre con polietilenimina al 0,33 % durante 30 min, y luego se lava con HEPES 50 mM, pH 7,4, BSA al 0,5 %. La reacción de fijación se transfiere a la placa de filtración y se lava 3 veces (1 ml por pocillo por lavado) con tampón de lavado. La placa se seca y se cuenta.
Tampón de unión: Hepes 50 mM, pH 7.4, MgCl2 5 mM, CaCl2 1 mM, BSA al 0,2 % filtrado y conservado a 4°C.
Radioligando: [3H]-CP55940 (Perkin Elmer #NET1051)
Tapón de lavado: Hepes 50 mM, pH 7,4, NaCl 500 mM, BSA al 0,1 %, filtrado y conservado a 4°C.
Un envase contiene suficientes membranas para al menos 200 ensayos (unidades), donde una unidad es la cantidad de membrana que producirá más de 10 veces la señal:fondo con CP55,940 2,5 nM marcado con 3H
Forma física
Líquido en tampón de envasado: Tris 50 mM pH 7,4, glicerol al 10 % y BSA al 1 % sin conservantes.
Método de embalaje: Las proteínas de membrana se ajustaron a la concentración indicada en el tampón de envasado, se congelaron rápidamente y se almacenaron a -80°C.
Método de embalaje: Las proteínas de membrana se ajustaron a la concentración indicada en el tampón de envasado, se congelaron rápidamente y se almacenaron a -80°C.
Información legal
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Código de clase de almacenamiento
12 - Non Combustible Liquids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 2
Punto de inflamabilidad (°F)
Not applicable
Punto de inflamabilidad (°C)
Not applicable
Certificados de análisis (COA)
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