P5521

Phosphatase, alkalisch aus Rinderdarmschleimhaut

≥2,000 DEA units/mg protein

• Synonym(e): Alkalische Phosphatase aus Rinderleber, Ortho-Phosphor-Monoester-Phosphohydrolase (Optimum im alkalischen Bereich)
• CAS-Nummer: 9001-78-9
• EC-Nummer: 3.1.3.1 (BRENDA, IUBMB)
• MDL-Nummer: MFCD00131849
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Form: aqueous solution
• Qualitätsniveau: 200
• Spezifische Aktivität: ≥2,000 DEA units/mg protein
• Mol-Gew.: dimer ~160 kDa
• Konzentration: ≥1.0 mg/mL
• Lagertemp.: 2-8°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Das Enzym ist ein Glykoprotein, das ca. 12 % Kohlenhydrate enthält (6 % Hexosen und 6 % andere neutrale Zucker). Jedes Molekül der Alkalischen Phosphatase enthält vier Zink-Atome und vier Disulfidbrücken. Die maximale Aktivität der Alkalischen Phosphatase wird in Gegenwart von Magnesium erreicht. Es katalysiert die Hydrolyse von Phosphatmonoestern wie p-Nitrophenylphosphat, Phenylphosphat, Phenolphthaleinphosphat, α-Glycerinphosphat, β-Glycerinphosphat, 2-Phosphorylglycerat, Triosephosphat, Glucose-6-phosphat, Glucose-1-phosphat, Fructose-1-phosphat, Fructose-6-phosphat, Adenosin-5-phosphat, Adenosin-3-phosphat, Phosphoenolpyruvat und β-Nicotinamidadenindinucleotidphosphat. Arsenat, Cystein, Iod, anorganisches Phosphat, Pyrophosphat, Diisopropylphosphat, Triphenylphosphat, Diisopropylfluorphosphat und L-Phenylalanin sind einige der starken Inhibitoren der alkalischen Phosphatase.

Anwendung

Alkalische Phosphatase kann zur Dephosphorylierung von Kasein und anderen Proteinen verwendet werden. Außerdem kann die alkalische Phosphatase zur Dephosphorylierung des 5′-Endes der DNA oder RNA verwendet werden, um Selbstligation zu vermeiden. DNA oder RNA kann nach der Dephosphorylierung mit alkalischer Phosphatase auch mit radiomarkiertem Phosphat (über die T4-Polynukleotidkinase) markiert werden.

Alkalische Phosphatase wird zur Konjugation von Antikörpern und anderen Proteinen für ELISA, Western Blots und histochemischen Nachweis verwendet. Es kommt routinemäßig bei der Dephosphorylierung von Proteinen wie Kasein und Nukleinsäuren zum Einsatz. Es kann zur Proteinmarkierung eingesetzt werden, wenn eine hohe Sensitivität erforderlich ist. Außerdem kann die Alkalische Phosphatase zur Dephosphorylierung des 5′-Endes der DNA oder RNA verwendet werden, um Selbstligation zu vermeiden. Nach der Dephosphorylierung mit Alkalischer Phosphatase kann DNA oder RNA auch mit radiomarkiertem Phosphat (über dieT4-Polynukleotidkinase) markiert werden. Produkt P5521 wird zur Untersuchung der GTP-Hydrolyse eingesetzt .

Das Enzym von Sigma wird im Assay von Phosphatidylinositol-4-phosphat und Phosphatidylsinositol-4,5-bisphosphat eingesetzt. Es wird auch für Alkalische-Phosphatase-Assays mit einer nafion^™-modifizierten Elektrode verwendet.

Durch die hohe spezifische Aktivität empfohlen für konjugierte Antikörper und Proteine.

Biochem./physiol. Wirkung

Alkalische Phosphatase aus Darmschleimhaut vom Rind ist am stabilsten im pH-Bereich von 7,5 bis 9,5. Das Enzym weist eine breite Spezifität für Phosphatester von Alkoholen, Aminen, Pyrophosphaten und Phenolen auf und erfordert divalente Ionen von Zink, Magnesium oder Kalzium, um seine Wirkung zu entfalten.

Das Enzym weist eine weite Spezifität für Phosphatester von Alkoholen, Aminen, Pyrophosphaten und Phenolen auf. Es kommt routinemäßig bei der Dephosphorylierung von Proteinen und Nukleinsäuren zum Einsatz.

Physikalische Eigenschaften

Die intestinale alkalische Phosphatase vom Rind ist ein dimeres Glykoprotein auf Membranbasis. Es sind mindestens drei Isoforme vorhanden, die üblicherweise zwei N-verknüpfte und ein oder mehrere O-verknüpfte Glykane pro Monomer besitzen.

Die intestinale alkalische Phosphatase vom Rind ist ein dimeres Glykoprotein auf Membranbasis. Es sind mindestens drei Isoforme vorhanden, die üblicherweise zwei N-verknüpfte und ein oder mehrere O-verknüpfte Glykane pro Monomer besitzen.2 Für die Aktivität dieses Enzyms sind Zink und zweiwertige Magnesium- oder Calcium-Ione erforderlich.

Einheitendefinition

Eine DEA-Einheit hydrolysiert 1 μmol 4-Nitrophenylphosphat pro Minute bei einem pH-Wert von 9,8 und 37 °C. (Eine Glycin-Einheit entspricht ungefähr 3 DEA-Einheiten.)

Physikalische Form

Lösung in 3,2 M Ammoniumsulfat, 1 mM MgCl₂ und 0,1 mM ZnCl₂, pH 7,0

Angaben zur Herstellung

Affinitätsgereinigt

Dieses Produkt wird aus Darmschleimhaut vom Rind gewonnen. Verdünnungen sollten in 10 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1–5 mM Magnesiumchlorid, 0,1–0, mM Zinkchlorid und 50 % Glycerol vorgenommen und bei 2–8 °C aufbewahrt werden.

Hinweis zur Analyse

Packungsgrössen basieren auf DEA-Einheiten

Proteinbestimmung durch Biuret.

Rechtliche Hinweise

Nafion is a trademark of The Chemours Company FC, LLC

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)