C9407
Collagenase aus Clostridium histolyticum
powder, Suitable for the digestion and isolation of physiologically active pancreatic islet cells, suitable for cell culture
Synonym(e):
Clostridiopeptidase A
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About This Item
Empfohlene Produkte
Biologische Quelle
Clostridium histolyticum
Qualitätsniveau
Form
powder
Spezifische Aktivität
≥800 units/mg solid
Mol-Gew.
68-130 kDa
Verpackung
pkg of 1 μmol
Methode(n)
cell culture | mammalian: suitable
pH-Wert
7.4
Lagertemp.
−20°C
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Allgemeine Beschreibung
Kollagenase-Enzym aus Clostridium histolyticum hat Kollagenbindungsdomäne (CBD) und polyzystische nierenerkrankungsartige (PKD-artige) Domänen. Es hat außerdem Ca2+-Bindungsstellen zur Calciumbindung, was für die Funktionalität wichtig ist. Kollagenase wird bei der Behandlung von Bindegewebserkrankungen (Dupuytren-Kontraktur)′ eingesetzt.
Anwendung
Dieses Produkt eignet sich für die Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem adultem und fötalem Hirngewebe, Lungenepithelgewebe und vielen anderen Epithelgeweben. Es ist ebenfalls bei Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau, bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Rattenleberzellen und der Hepatozytenpräparation wirksam. Kollagenase wird ebenfalls bei der Präparation von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glycosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Dieses Enzym wurde für die Freisetzung von Hepatozyten bei einer Konzentration von ca. 1 mg/mL getestet. Konzentrationen für den Verdau liegen zwischen 0,1 und 5 mg/mL.
Kollagenase von Clostridium histolyticum wird beim Verdau folgender Proben eingesetzt:
- Proben zur Isolierung von Langerhans-Inseln
- Pulmonalarterieproben zur Isolierung von pulmonalvaskulären glatten Muskelzellen (PVSMCs)
- Knorpelproben zur Isolierung von Chondrozyten
Biochem./physiol. Wirkung
Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.
Das Kollagenase-Produkt ist ein Enzymgemisch, das von C. histolyticum sezerniert wird, wobei unterschiedliche Produkte durch die relativen Verhältnisse der 10-18 Komponenten in den sezernierten Enzymen differenziert werden. Die Hauptkomponenten sind zwei Kollagenasen: Clostripain und eine neutrale Protease. Die synergistische Aktion dieser Enzyme baut Kollagen und andere intrazelluläre Komponenten ab. Die Aktion von Kollagenase-Enzymen sowie der neutralen Protease ist für eine effektive Freisetzung von Zellen aus Gewebe erforderlich. Verschiedene Typen von Kollagen sind die natürlichen Substrate für Kollagenase.
Vorsicht
Bei Lieferung ist dieses Produkt für die Dauer von einem Jahr bei -20 °C haltbar. Es kommt innerhalb von 30 Tagen bei 37 °C, 50 °C und -20 °C zu keinem Verlust bei der FALGPA- oder Proteaseaktivität. Lösungen von RohKollagenase sind stabil, wenn sie schnell in Aliquoten (10 mg/ml) eingefroren und bei -20 °C tiefgekühlt gelagert werden. Weitere Gefrier-/Auftauzyklen schädigen die Lösung. Bei Lagerung auf Eis behält das Produkt seine gesamte Aktivität über 7 Stunden.
Einheitendefinition
Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.
Angaben zur Herstellung
Dieses Produkt wird aus Kollagenase Typ XI (C7657) von Clostridium histolyticum hergestellt. Es enthält außerdem Clostripain, unspezifische neutrale Protease und tryptische Aktivitäten. Lösungen werden üblicherweise mit 1-2 mg/ml in TESCA-Puffer hergestellt (enthält 50 mM TES, 0,36 mM Calciumchlorid, pH-Wert 7,4 bei 37 °C).
Substrat
Produkt-Nr.
Beschreibung
Preisangaben
Signalwort
Danger
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Zielorgane
Respiratory system
Lagerklassenschlüssel
11 - Combustible Solids
WGK
WGK 1
Flammpunkt (°F)
Not applicable
Flammpunkt (°C)
Not applicable
Persönliche Schutzausrüstung
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
Analysenzertifikate (COA)
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Protokolle
This procedure may be used for Collagenase products.
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