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KAPA LongRange

HotStart ReadyMix^™, suitable for PCR, with dye

• Synonym(e): PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Haltbarkeit: ≤18 mo.
• Leistungsmerkmale: Long Range PCR; dNTPs included; hotstart
• Verpackung: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK3601); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK3602)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: purified DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Das Langstrecken-PCR-System KAPA HotStart^® ReadyMix^™ mit Farbstoff ist eine Mischung aus Taq-DNA-Polymerase und einer speziell entwickelten archaealen DNA-Polymerase (B-Familie) mit Korrekturlesefunktion. Dieses Zwei-Enzym-System wurde speziell zur Unterstützung der Langstrecken-PCR und/oder sensitiven PCR entwickelt und besitzt eine 3–4 Mal höhere Fidelität als die Taq-Polymerase. In der HotStart-Formulierung wird KAPA Longe Range mit einem proprietären Antikörper kombiniert, der das Enzym bis zum ersten Denaturierungsschritt inaktiviert, wobei unerwünschte Amplifikationsprodukte eliminiert und die Reaktionseffizienz und -empfindlichkeit erhöht werden.

Der KAPA HotStart ReadyMix mit Farbstoff des Typs Long Range ist ebenfalls als 2X ReadyMix mit Ladefarbstoff erhältlich, der alle für die PCR benötigten Komponenten außer Primern und Template enthält. Der Ladefarbstoff im Reaktionspuffer ermöglicht es Ihnen, die PCR-Produkte ohne zusätzliche Arbeitsschritte direkt auf das Agarosegel zu laden.

Anwendung

KAPA LongRange HotStart^® ReadyMix^™ mit Farbstoff wird für Folgendes verwendet:

• Amplifikation von langen Targets und/oder niedrigen Mengen
• Standardmäßige Kurz- und Mittelstrecken-Polymerase-Kettenreaktion (PCR)
• TA-Klonierung
• Gezielte Probenanreicherung für die DNA-Sequenzierung der nächsten Generation
• Amplifikation des Komplettgenoms

Biochem./physiol. Wirkung

Sowohl die DNA-Polymerase KAPA Taq HotStart^® als auch eine modifizierte archaeale DNA-Polymerase (Typ B) besitzen eine 5′→3′-Polymerase-Aktivität, aber nur die KAPA-Taq-HotStart-DNA-Polymerase verfügt über 5′→3′-Exonuklease-Aktivität und nur die Typ-B-DNA-Polymerase besitzt 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität. Die Fidelität von KAPA LongRange HotStart ist 2–4 Mal höher als die Fidelität der Taq-DNA-Polymerase, aber niedriger als die Fidelität von rein korrekturlesenden Polymerasen wie KAPA HiFi. Mit KAPA LongRange HotStart erzeugte Reaktionsprodukte haben polyA-Enden und können zu TA-Klonierungsvektoren geklont werden.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Amplifiziert lange Targets mit hoher Empfindlichkeit:

• Amplifikation von Targets mit hoher Sensitivität und Spezifität von bis zu 15 kb
• Hohe Ausbeuten bei niedriger Menge an Eingabe-DNA

Überragende Leistung bei komplexen Zielen:

• Zeigt eine hohe Ausbeute sowie eine höhere Sensitivität und Spezifität, wo Langstrecken-Systeme der Konkurrenz versagen

Einige Anmerkungen:

• KAPA LongRange HotStart ist eine Mischung aus KAPA Taq HotStart und einer korrekturlesenden DNA-Polymerase.
• Geeignet für Kurz-, Mittel- und Langstrecken-PCR sowie für PCR mit geringen Mengen an Template-DNA.
• Hat eine 2–4 Mal höhere Fidelität als Taq.
• Bei kurzen Amplikonen kann zur Erhöhung der Ausbeute und/oder Fidelität die Taq-DNA-Polymerase ersetzt werden.
• Mittel- bis Langstrecken-Targets können mit hoher Ausbeute und Sensitivität amplifiziert werden.
• 2X ReadyMix mit Farbstoff enthält zwei inerte Tracking-Farbstoffe, damit PCR-Produkte zu Analysezwecken direkt auf Agarosegele geladen werden können.

Qualität

Jede Charge der DNA-Polymerase KAPA LongRange HotStart enthält nachweislich <2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). Der 2X KAPA LongRange HotStart ReadyMix wird strengen Qualitätskontrollprüfungen unterzogen, ist frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllt strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitlagerung sollte wieder bei -20 °C erfolgen.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Rechtliche Hinweise

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Nur Kit-Komponenten

• KAPA Long Range DNA Polymerase or KAPA Long Range HotStart^® DNA Polymerase 5 U/μL or 2.5 U/μL
• 1X KAPA Long Range Buffer
• dNTP Mix 0.3mM of each dNTP at 1X
• 2X KAPA LongRange HotStart^® ReadyMix with dye
• MgCl₂ at 1X 2 mM

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash