ENDOARGS-RO

Endoproteinase Asp-N, Sequenzierqualität

from Pseudomonas fragi

• Synonym(e): Protease
• EC-Nummer: 3.4.24.33 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 12352204

Eigenschaften

• Assay: ≥90% (SDS-PAGE)
• Form: lyophilized
• Spezifische Aktivität: ≥20000 units/mg protein
• Mol-Gew.: 27 kDa
• Verpackung: pkg of 2 μg (11420488001); pkg of 3 × 2 μg (11054589001)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Optimaler pH-Wert: 7.0-8.0
• pH-Bereich: 6.5-9.0
• Lagertemp.: 2-8°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Der Wildtyp von Pseudomonas fragi sezerniert eine Metallprotease, die Peptidbindungen N-terminal bei kleinen hydrophilen Aminosäuren spaltet. Eine Mutante dieses Stamms produziert die Endoproteinase Asp-N in Sequenzierqualität, die als hochreine und spezifische Protease isoliert wird.

Spezifität

Endoproteinase Asp-N in Sequenzierqualität ist eine Metallprotease. In Phosphat-, Acetat- oder Tris-Puffer bei pH 6,0–8,5 spaltet sie spezifisch Peptidbindungen N-terminal bei Asparagin- und Cysteinsäure. Bei der Reduzierung oder Alkylierung von Cystein wird nur -↓-Asp-X gespalten.
Die Spezifität der Endoproteinase Asp-N in Sequenzierqualität wird mit Glucagon als Substrat verifiziert. Hohe Konzentrationen von Endoproteinase Asp-N in Sequenzierqualität (1 Gewichtsteil Enzym und 10 Gewichtsteile Glucagon) werden inkubiert, um Spuren von Verunreinigungen wie kontaminierende Proteasen nachzuweisen.
Hitzeinaktivierung: Die Protease wird durch 5-minütiges Sieden gestoppt.

Anwendung

Verwenden Sie Endoproteinase Asp-N in Sequenzierqualität zur Proteinstrukturanalyse und zur Sequenzanalyse.

Angaben zur Herstellung

Arbeitskonzentration: 2 μg /50 μl bidestilliertes Wasser
Ein Fläschchen (= 2 μg Enzym) wird in 50 μl bidestilliertem Wasser rekonstituiert. Dadurch entsteht eine Pufferkonzentration von 10 mM Tris-HCl, pH 7,5.
Arbeitslösung: Als Lösungsmittel wird bidestilliertes Wasser empfohlen.
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): -15 bis -25 °C
Eine Lösung in bidestilliertem Wasser ist bei maximal 2 bis 8 °C 10 eine Woche oder bei -15 bis -25 °C etwa 1 Monat stabil; wiederholtes Auftauen sollte vermieden werden.

Rekonstituierung

Lyophilisierte Endoproteinase Asp-N in Sequenzierqualität wird in 50 μl bidestilliertem Wasser rekonstituiert. Dadurch entsteht eine Pufferkonzentration von 10 mM Tris-HCl, pH 7,5. Um eine Autolyse zu vermeiden, sollte die Inkubationstemperatur 37 °C nicht überschreiten.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash