MABS1254

Anti-O-GlcNAc-Antikörper, Klon CTD110.6

clone CTD110.6, from mouse

• Synonym(e): O-GlcNAc, beta-O-GlcNAc, O-Linked N-Acetylglucosamine, beta-O-linked N-acetylglucosamine
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: mouse
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: purified immunoglobulin
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: CTD110.6, monoclonal
• Speziesreaktivität (Voraussage durch Homologie): all
• Methode(n): ELISA: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgMκ
• Posttranslationale Modifikation Target: glycosylation
• Angaben zum Gen: human ... OGT(8473)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die posttranslationale Proteinmodifikation mittels β-verknüpftem N-Acetylglucosamin (β-GlcNAc) durch die Hydroxylgruppen an Serin- oder Threoninresten wird als O-verknüpfte β-GlcNAc oder einfach O-GlcNAc bezeichnet. O-GlcNAc ist eine der am häufigsten vorkommenden posttranslationalen Modifikationen in den nukleozytoplasmatischen Kompartimenten aller Tiere und Pflanzen. Anders als andere Arten der Proteinglykosylierung erfolgt O-GlcNAc ausschließlich in den nukleären und zytoplasmatischen Kompartimenten und sie wird in der Regel nicht weiter modifiziert, um längere Strukturen zu bilden. Darüber hinaus ist die O-GlcNAcylierung ein äußerst dynamischer und reversibler Prozess. Die O-GlcNAc-Transferase (OGT) bindet O-GlcNAc an Proteine an spezifischen Serin- und Threoninresten, während O-GlcNAcase die Entfernung/Hydrolyse von O-GlcNAc aus Proteinen katalysiert. Ein dynamisches Zusammenspiel zwischen O-GlcNAcylierung und Serin/Threonin-Phosphorylierung spielt in der Tat eine wichtige Rolle bei der Regulierung der zellulären Signalübertragung. Tau und RNA-Polymerase II (Pol II) sind zwei bekannte Proteine, die durch O-GlcNAcylierung modifiziert werden. Im Gehirn von Alzheimer-Patienten wird Tau umfangreich phosphoryliert und weniger stark O-GlcNAcyliert. Ebenso wird O-GlcNAc entfernt und durch O-Phosphat an der Poly-II-CTD ergänzt, wenn die Elongationsphase der Transkription eingeleitet wird.

Spezifität

Die Zielmodifizierung ist nicht speziesspezifisch.

Klon CTD110.6 hat Serin- und Threoninreste mit beta-O-verknüpftem GlcNAc, aber nicht mit alpha-O-verknüpftem GlcNAc, spezifisch nachgewiesen. Durch die Gegenwart von GlcNAc, jedoch nicht von GalNAc, wurde der Nachweis der Zielmodifizierung blockiert. Klon CTD110.6 hat Peptide mit nicht modifizierten Serin- und Threoninresten nicht erkannt (Comer, F.I., et al. (2001). Anal. Biochem. 293(2):169–177).

Immunogen

An KLH konjugiertes Peptid mit einem O-GlcNAc-modifizierten Serinrest.

Epitop: beta-O-verknüpftes GlcNAc.

Anwendung

Anti-O-GlcNAc-Antikörper, Klon CTD110.6, ist ein Antikörper gegen O-GlcNac zur Verwendung in Western-Blots und Immunpräzipitation.

Forschungskategorie
Signalisierung

Forschungsunterkategorie
Allgemeine posttranslationale Modifikation

Western-Blot-Analyse: Mit 1,0 µg/ml einer repräsentativen Charge wurden O-GlcNAcylierte Proteine in 7,5–15 µg Lysat aus embryonalen Fibroblasten von Wildtypmäusen (mouse embryonic fibroblast, MEF), aber nicht in O-GlcNAc-Transferase/OGT-defizientem MEF-Lysat nachgewiesen (Mit freundlicher Genehmigung von Dr. Natasha Zachara und Gokben Yildirir, M.S.).
ELISA-Analyse: Mit einer repräsentativen Charge wurde das Peptid mit C-terminaler Domäne (CTD) der RNA-Polymerase II (YSPTSPS) mit einem einzigen O-GlcNAcylierten Serin- oder Threoninrest, nicht jedoch das nicht modifizierte Peptid nachgewiesen (Comer, F.I., et al. (2001). Anal. Biochem. 293(2):169–177).
Immunpräzipitationsanalyse: Mit einer repräsentativen Charge wurden O-GlcNAcylierte Proteine aus menschlichen pluripotenten Stammzellen (human Pluripotent Stem Cells, hPSC) ausgefällt (Maury, J.J., et al. (2013). Stem Cell Res. 11(2):926–937).
Immunpräzipitationsanalyse: Mit einer repräsentativen Charge wurden O-GlcNAcylierte Proteine aus HeLa-Zellextrakten ausgefällt (Comer, F.I., et al. (2001). Anal. Biochem. 293(2):169–177).
Western-Blot-Analyse: Mit einer repräsentativen Charge wurde ein ähnliches Ausmaß der O-GlcNAcylierung in undifferenzierten, differenzierenden und terminal differenzierten menschlichen pluripotenten Stammzellen (human Pluripotent Stem Cells, hPSC) nachgewiesen (Maury, J.J., et al. (2013). Stem Cell Res. 11(2):926–937).
Western-Blot-Analyse: Mit einer repräsentativen Charge wurde das BSA-konjugierte Peptid mit C-terminaler Domäne (CTD) der RNA-Polymerase II (YSPTSPS) mit beta-O-verknüpftem GlcNAc, aber nicht mit alpha-O-verknüpftem GlcNAc nachgewiesen. Das entsprechende nicht modifizierte Peptid wurde ebenfalls nicht nachgewiesen. Durch die Gegenwart von GlcNAc, jedoch nicht von GalNAc, wurde der Nachweis der Zielbanden blockiert (Comer, F.I., et al. (2001). Anal. Biochem. 293(2):169–177).
Western-Blot-Analyse: Mit einer repräsentativen Charge wurden O-GlcNAcylierte Proteine in HeLa-Zellkernextrakt sowie aus HeLa-Zellkern- und zytosolischen Extrakten aufgereinigte O-GlcNAcylierte Proteine mittels WGA-Säule (Wheat Germ Agglutinin, Weizenkeimagglutinin) nachgewiesen. Durch die Antikörperblockierung durch das Immunogenpeptid vor dem Immunblot wurde der Nachweis der Zielbanden blockiert (Ho, T., et al. (2001). Anal. Biochem. 293(2):169–177).
Western-Blot-Analyse: Mit einer repräsentativen Charge wurde eine Hochregulierung der O-GlcNAcylierten Proteine in Jurkat-Zellen nachgewiesen, die mit dem Glucosaminidase-Hemmer PUGNAc und Glucosamin, dem Zwischenprodukt des Hexosamin-Signalwegs, behandelt wurden (Comer, F.I., et al. (2001). Anal. Biochem. 293(2):169–177).

Qualität

Beurteilt mittels Western-Blot in HeLa-Zelllysat.

Western-Blot-Analyse: Mit 4,0 µg/ml dieses Antikörpers wurden O-GlcNAcylierte Proteine in 10 µg HeLa-Zelllysat nachgewiesen.

Zielbeschreibung

Ja nach Größe des/der O-GlcNacylierten Proteins/e variabel.

Physikalische Form

Aufgereinigter monoklonaler Maus-IgMκ-Antikörper in PBS mit 0,05 % Natriumazid.

Format: Aufgereinigt

Lagerung und Haltbarkeit

Bei 2–8 °C 1 Jahr ab Empfangsdatum haltbar.

Sonstige Hinweise

Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.

Haftungsausschluss

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