Epigenetica

Risorse correlate ai prodotti

Chromatin Analyses Product Selection Guide
kit ChIC/CUT&RUN
Saggio di immunoprecipitazione di complessi RNA-proteine (RIP)
Saggio di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP)

Modificazioni istoniche

La cromatina è costituita dal DNA genomico e dalle proteine associate ed è localizzata nel nucleo. Le modifiche alla struttura della cromatina e l'interazione delle proteine della cromatina svolgono un ruolo diretto nella regolazione epigenetica. L’organizzazione strutturale della cromatina è aiutata dagli istoni, un’importante classe di proteine della cromatina. Essi costituiscono il nucleosoma, un complesso contenente 2 subunità di ciascuno degli istoni H2A, H2B, H3 e H4. All'esterno del complesso, l’istone linker H1 lega il DNA internucleosomale. Il complesso del nucleosoma è responsabile del mantenimento della struttura compatta della cromatina. Modifiche istoniche sito-specifiche, come metilazione, acetilazione, fosforilazione, ubiquitinazione e citrullinazione, possono alterare localmente la struttura della cromatina e regolare la trascrizione, la riparazione, la ricombinazione e la replicazione. Le proteine non istoniche associate alla cromatina rappresentano un gruppo eterogeneo di migliaia di tipi di proteine, inclusi fattori di trascrizione, polimerasi, recettori ormonali e altri enzimi nucleari.

Metilazione del DNA

La metilazione del DNA è un importante meccanismo epigenetico che regola il silenziamento genico, l'imprinting, lo sviluppo embrionale e la stabilità cromosomica. La metilazione del DNA avviene sul carbonio in posizione 5 dei residui di citosina principalmente a livello dei dinucleotidi CpG con formazione di 5-metilcitosina (5-mC). La reazione è catalizzata dalle DNA metiltransferasi (DNMT). I residui di 5-metilcitosina possono inoltre venire idrossilati dagli enzimi TET a formare 5-idrossimetilcitosina (5-hmC), che ha ruoli diversi rispetto alla 5-mC. Forniamo robusti strumenti che consentono non solo di rilevare e quantificare la 5-mC e la 5-hmC, ma anche di distinguere accuratamente tra le due modifiche.

Kit di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP)

La rilevazione quantitativa delle modificazioni istoniche è importante per una migliore comprensione della regolazione epigenetica dei processi cellulari nei tessuti normali o cancerosi. Le tecniche più utilizzate per lo studio di come le modificazioni istoniche e le proteine che legano il​DNA, come i fattori di trascrizione, influenzano l'espressione genica sono l’immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) in combinazione con la reazione a catena della polimerasi quantitativa (qPCR). La ChIP prevede il crosslinking delle proteine​alle sequenze di DNA, vengono quindi aggiunti anticorpi e biglie per l’immunoprecipitazione e il pull down degli istoni modificati o di altre proteine di interesse. Le modificazioni istoniche più comunemente studiate e meglio comprese sono l'acetilazione, la fosforilazione, la metilazione e l'ubiquitinazione. Le modifiche istoniche regolano la trascrizione, la riparazione, la ricombinazione e la replicazione del DNA e possono alterare localmente la struttura della cromatina. Esplora la nostra vasta gamma di kit per l'analisi dei complessi pattern di modificazioni istoniche.

Controllo trascrizionale e post-trascrizionale: regolazione genica basata sugli RNA

Tradizionalmente, la ricerca sull'espressione genica si è concentrata sulla regolazione trascrizionale legata alle interazioni dei fattori di trascrizione con specifici siti di legame, alle modifiche degli istoni della cromatina e alle dinamiche della cromatina associate a variazioni della trascrizione genica. Attualmente gli studi sull'espressione genica sono volti a comprendere le dinamiche della regolazione a livello di RNA, con l'obiettivo finale di colmare il gap tra il controllo trascrizionale e l’espressione proteica. Le RNA-binding proteins (RBPs) svolgono un ruolo chiave nella regolazione post-trascrizionale dell'espressione genica.

Regolazione basata sugli RNA: Kit per l’immunoprecipitazione di complessi RNA-proteine (RIP)

La RIP può essere vista come l'analogo per l’RNA della più famosa ChIP. La RIP può essere utilizzata per identificare specifiche molecole di RNA associate a specifiche proteine nucleari o citoplasmatiche. La RIP inizia con l'immunoprecipitazione dei complessi endogeni tra RNA binding protein e RNA associati. Dopo la purificazione gli RNA possono essere analizzati e identificati come mRNA o RNA non codificanti mediante una varietà di applicazioni tra cui RT-PCR quantitativa, analisi microarray (RIP-Chip) e sequenziamento massivo parallelo (RIP-Seq).