C9891

Collagenasi

Type IA, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid, For general use

• Sinonimo/i: Clostridiopeptidasi A
• Numero CAS: 9001-12-1
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-582-9
• Numero MDL: MFCD00130830
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Proprietà

• Livello qualitativo: 200
• Forma fisica: essentially salt-free, lyophilized powder
• Attività specifica: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• PM: 68-130 kDa
• tecniche: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Solubilità: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble
• applicazioni: diagnostic assay manufacturing
• Condizioni di spedizione: wet ice
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Applicazioni

L'enzima è stato anche usato insieme ad altre proteasi per la disgregazione di tumori umani, del rene di topo, del cervello umano e dei tessuti epiteliali polmonari. È inoltre utile negli studi di perfusione epatica e renale, digestione del pancreas, isolamento di cellule non parenchimali di fegato di topo e di epatociti. L'enzima di Sigma è stato utilizzato per la digestione del collagene di tipo I da ossa trabecolari e corticali bovine. È stato anche usato come controllo positivo nel test con FALGPA su cellule di Streptococco di gruppo B.

Idoneo per l′impiego nella preparazione di sospensioni di cellule singole per successivo sequenziamento.

Azioni biochim/fisiol

Il rilascio delle cellule dal tessuto richiede l′azione combinata degli enzimi collagenasi e proteasi neutra. La collagenasi è attivata da quattro grammi-atomo di calcio (Ca²⁺) per mole di enzima. Si ritiene che il filtrato della coltura contenga almeno 7 diverse proteasi con pesi molecolari compresi fra 68 e 130 kDa. Il pH ottimale è 6.3-8.8 L′enzima è usato tipicamente per digerire i componenti del connettivo nei campioni di tessuto per isolare le cellule singole. Il trattamento con collagenasi può causare la morte di qualche cellula. Per la digestione si usano tipicamente concentrazioni comprese fra 0,1 e 5 mg/mL. Al fine di ottenere una soddisfacente efficienza di dissociazione senza causare un′eccessiva mortalità cellulare, si può variare la durata della reazione da 15 minuti fino a diverse ore. Per l′attività enzimatica è preferibile l′uso del il tampone Krebs Ringer con calcio e BSA, è inoltre necessaria la presenza dello ione Zn²⁺ . L′enzima riconosce la sequenza -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, dove X è spesso un aminoacido neutro. Etilenglicole-bis (β-amminoetil etere) -N, N, N′, acido N′-tetraacetico (EGTA) 4; β-mercaptoetanolo; glutatione (ridotto); acido tioglicolico, sodio; 2,2′-dipiridile; 8-idrossichinolina e cisteina sono in grado di inibire l'attività dell'enzima.

La collagenasi è attivata da quattro grammi atomo di calcio per mole di enzima. È inibita da etilen-glicol-bis(beta-amminoetil etere) - acido N, N, N′,N′-tetraacetico, beta-mercaptoetanolo, glutatione, acido tioglicolico e 8-idrossichinolina.

Avvertenza

Questo prodotto, così come fornito, è stabile per un anno a -20°C. Non si osserva perdita in FALGPA o nell′attività della proteasi in 30 giorni a 37°C, 50°C e -20°C. Soluzioni di collagenasi grezza sono stabili se congelate rapidamente in aliquote (a 10 mg/mL) e tenute a -20°C. Ulteriori cicli di congelamento-scongelamento finiscono per danneggiare la soluzione. Il prodotto preserva il 100% di attività per oltre 7 ore quando è tenuto in ghiaccio.

Definizione di unità

Una unità di digestione del collagene (CDU) libera peptidi da collagene proveniente da tendine d′Achille bovino equivalente in colore ninidrina a 1,0 μmole di leucina in 5 ore a pH 7,4 a 37 °C in presenza di ioni calcio. Una unità di idrolisi FALGPA idrolizza 1,0 μmole di furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala per minuto a 25 °C. Una unità di proteasi neutra idrolizza caseina e produce colore equivalente a 1,0 μmole di tirosina per 5 ore a pH 7,5 a 37 °C. Una unità di clostripaina idrolizza 1,0 μmole of BAEE per minuto a pH 7,6 a 25 °C in presenza di DTT.

Nota sulla preparazione

Questo prodotto è equivalente alla prima frazione di solfato di ammonio al 40% di Mandl, I., et al., J. Clin. Invest., 32, 1323 (1953). Le soluzioni tipicamente sono preparate alla concentrazione di 1-2 mg/mL in tampone TESCA (contenente 50 mM TES, 0,36 mM di calcio cloruro, pH 7,4 a 37 °C).

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H334
• Consigli di prudenza: P261 - P284 - P501
• Classi di pericolo: Resp. Sens. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable
• Dispositivi di protezione individuale: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves