BGALS-RO

β-Glucuronidasi

from E. coli K 12

• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.2.1.31 (BRENDA, IUBMB)
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.28

Proprietà

• Origine biologica: Escherichia coli K12
• Livello qualitativo: 100
• Forma fisica: solution
• PM: M_r ~220 kDa
• Confezionamento: pkg of 1 mL (03707580001); pkg of 15 mL (03707601001); pkg of 5 mL (03707598001)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• Condizioni di stoccaggio: (Keep container tightly closed in a dry and well-ventilated place.)
• Parametri: 48 °C optimum reaction temp.
• tecniche: activity assay: suitable
• Colore: colorless
• pH ottimale: 6.0-6.5
• Solubilità: water: soluble
• Compatibilità: suitable for enzyme test
• N° accesso UniProt: ; P05804
• applicazioni: detection; sample preparation
• Temperatura di conservazione: 2-8°C
• Informazioni sul gene: Escherichia coli ... uidA(946149)

Descrizione

Descrizione generale

Glucuronidasi a 25 °C, o 140 U/mg a 37 °C, a pH 7 con 4-nitrofenil-β-D-glucuronide come substrato; 1 ml β-Glucuronidasi contiene non meno di 140 U a 37 °C.

Specificità

Scinde l'acido β-glucuronico terminale legato a mono-, oligo- o polisaccaridi o a fenolo.

Applicazioni

Le β-glucuronidasi sono utilizzate diffusamente nei laboratori di ricerca e nei laboratori di analisi per l'idrolisi enzimatica dei β-glucuronidi steroidei. La β-Glucuronidasi è usata:

• per l′idrolisi di coniugati steroidei (glucuronidi) in campioni di urine (pH 6,0–6,5)
• in analisi di doping
• per la rivelazione di benzodiazepine in piccole quantità
• per scindere i glucuronidi durante la preparazione di campioni destinati ad analisi GC-MS, HPLC, analisi immunologiche o analisi di altro genere.

È usata inoltre per l'idrolisi di enterolattone glucuronide, testosterone glucuronide ed epitestosterone glucuronide plasmatici.

Azioni biochim/fisiol

La glucuronazione è uno dei principi base del metabolismo. Molte sostanze introdotte nel corpo umano subiscono un processo metabolico che include la coniugazione con acido glucuronico da parte delle UDP-glucuronosiltransferasi (UGT). βLa b-gucuronidasi, detta anche β-D-glucuronoside glucuronosoidrolasi, catalizza il trasferimento di un gruppo glucuronilico su diverse molecole biologiche e farmacologicamente attive, sia endogene che esogene. Il glucuronide è in generale più solubile e meno tossico e viene più facilmente escreto dal corpo umano rispetto alla molecola originale. Per analizzare questi coniugati di molecole farmacologiche presenti nei fluidi corporei, come urina e plasma, è necessaria la deconiugazione del glucuronide. L'idrolisi enzimatica prima del rilevamento è essenziale per raggiungere un'elevata sensibilità durante l'analisi. Dopo l′idrolisi il campione può essere analizzato mediante spettroscopia di massa, gascromatografia, HPLC, saggi immunologici o altri metodi analitici.

Caratteristiche e vantaggi

βLa β-glucuronidasi di E. Coli è altamente specifica per i β-glucuronidi ed è in grado di idrolizzare molto rapidamente i β-glucuronidi degli steroidi e di scindere molti altri tipi di glucuronidi, come quelli di benzodiazepine, oppioidi e i cannabinoidi. βLa β-glucuronidasi è utilizzata per l'idrolisi enzimatica dei glucuronidi nei fluidi biologici, principalmente le urine. Le sostanze utilizzate per il doping sono glucurono-coniugate, il che significa che un'efficace analisi antidoping si basa molto spesso sulla scissione enzimatica delle molecole coniugate della sostanza d′abuso da parte della β-glucuronidasi.

• Analisi rapide grazie all'elevata attività specifica degli enzimi′.
• Screening rapido di steroidi, benzodiazepine, cannabinoidi e oppioidi.
• Risparmio di tempo grazie ad una procedura che non richiede né la purificazione della reazione, né di tamponare le urine.

Definizione di unità

L'unità internazionale dell'attività della β-glucuronidasi è rappresentata dalla quantità di enzima che aumenta il tasso di rilascio del 4-nitrofenolo dal 4-nitrofenil -β-D-glucuronide (4NPG) di 1 μM alla temperatura di +25 °C e a pH 7,0.
In precedenza veniva utilizzata l′unità di Fishman. Questa unità misura il rilascio di fenolftaleina dal suo glucuronide (PPG). Non è possibile misurare le attività relative di diverse preparazioni per i β-glucuronidi di steroidi confrontando le loro attività rispetto al PPG. Molte preparazioni non catalizzano allo stesso modo nelle urine l'idrolisi di PPG, 4NPG o dei vari β-glucuronidi steroidei. La scelta del 4NPG come substrato standard si basa sulle seguenti considerazioni:

• Le costanti di Michaelis per i due substrati sono simili (K_M = 2 ×10^-4 M per 4 NPG e K_M = 6 ×10^-5 M per PPG), ma i corrispondenti tassi di idrolisi differiscono:
• Il 4NPG viene scisso circa 5 volte più velocemente del PPG;
• Nel caso del PPG si verifica l'inibizione da parte del substrato in eccesso, cosa che non si osserva con il 4NPG.

Stato fisico

Soluzione in glicerolo al 50%, pH circa 6,5
(15 mL in un flacone)

Altre note

La β-glucuronidasi da E. coli è essenzialmente priva di attività solfatasica ed è particolarmente efficiente nella scissione dei coniugati di steroidi e benzodiazepine.
Da utilizzare solo per ricerca nelle scienze naturali. Non usare in procedure diagnostiche.

Note legali

La vendita del prodotto non esaurisce né garantisce alcun diritto su brevetti di terzi, compresi i brevetti di società del gruppo F. Hoffmann - La Roche AG, in particolare per l'uso di anticorpi modificati ottenuti utilizzando questo prodotto.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): No data available
• Punto d’infiammabilità (°C): No data available