12156792910
Roche
Kit di rilevamento della morte cellulare in situ con TMR red
sufficient for ≤50 tests
Sinonimo/i:
red, tm, in situ cell death detection kit, tm red, in situ cell death detection kit
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352200
Prodotti consigliati
impiego
sufficient for ≤50 tests
Livello qualitativo
Produttore/marchio commerciale
Roche
tecniche
flow cytometry: suitable
Temperatura di conservazione
−20°C
Categorie correlate
Descrizione generale
I metodi più comunemente usati per la determinazione dell'apoptosi comprendono l'analisi del DNA genomico mediante elettroforesi su gel di agarosio e i saggi di frammentazione del DNA basati su 3H-timidina o, 5-Bromo-2′-desossi-uridina. Tali metodi prevedono la separazione, in una data popolazione cellulare, del DNA frammentato a basso peso molecolare dal DNA non frammentato ad alto peso molecolare. Pertanto, questi metodi non forniscono informazioni sulla morte di una singola cellula in una data popolazione cellulare o nelle sezioni di tessuto. In alternativa, è possibile riconoscere le singole cellule apoptotiche al microscopio in base alla caratteristica condensazione e frammentazione della cromatina nucleare; questo metodo è però soggettivo e limitato a una finestra temporale relativamente limitata nella quale i cambiamenti morfologici sono massimi.
Il segno distintivo dell'apoptosi è la degradazione del DNA, che nelle prime fasi riguarda le regioni del DNA connettivo internucleosomale. La frammentazione del DNA può produrre rotture sia a doppio che a singolo filamento (nick). Entrambi i tipi di rottura possono essere rilevati marcando, in una reazione enzimatica, i terminali 3′-OH liberi con nucleotidi modificati (ad es biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceina-dUTP) L′enzima desossinucleotidil transferasi terminale (TdT) catalizza la polimerizzazione, indipendente dal DNA stampo, dei desossiribonucleotidi all'estremità 3′del DNA sia a singolo che a doppio filamento. Questo metodo è chiamato anche TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling). In alternativa, i gruppi 3′-OH liberi possono essere marcati usando una DNA polimerasi mediante un meccanismo templato -dipendente detto Nick translation. Tuttavia il metodo TUNEL è considerato più sensibile e veloce.
Campione: cellule in sospensione, preparati mediante strisci cellulari e cytospin, cellule aderenti coltivate su vetrini, sezioni di tessuto congelate e incluse in paraffina.
Principio
Il kit per il rilevamento della morte cellulare in situ con TMR red si basa sull′identificazione delle rotture del DNA a singolo e doppio filamento che si verificano nelle fasi iniziali dell′apoptosi.
Le cellule apoptotiche vengono fissate e permeabilizzate. In seguito, le cellule vengono incubate con la miscela di reazione TUNEL che contiene TdT e TMR-dUTP. Durante il periodo di incubazione, la TdT catalizza l′aggiunta di TMR-dUTP ai gruppi 3′-OH liberi nel DNA a singolo e doppio filamento. Dopo il lavaggio, la marcatura incorporata nei punti danneggiati del DNA viene visualizzata in citometria a flusso e/o in microscopia a fluorescenza.
Il segno distintivo dell'apoptosi è la degradazione del DNA, che nelle prime fasi riguarda le regioni del DNA connettivo internucleosomale. La frammentazione del DNA può produrre rotture sia a doppio che a singolo filamento (nick). Entrambi i tipi di rottura possono essere rilevati marcando, in una reazione enzimatica, i terminali 3′-OH liberi con nucleotidi modificati (ad es biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceina-dUTP) L′enzima desossinucleotidil transferasi terminale (TdT) catalizza la polimerizzazione, indipendente dal DNA stampo, dei desossiribonucleotidi all'estremità 3′del DNA sia a singolo che a doppio filamento. Questo metodo è chiamato anche TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling). In alternativa, i gruppi 3′-OH liberi possono essere marcati usando una DNA polimerasi mediante un meccanismo templato -dipendente detto Nick translation. Tuttavia il metodo TUNEL è considerato più sensibile e veloce.
Campione: cellule in sospensione, preparati mediante strisci cellulari e cytospin, cellule aderenti coltivate su vetrini, sezioni di tessuto congelate e incluse in paraffina.
Principio
Il kit per il rilevamento della morte cellulare in situ con TMR red si basa sull′identificazione delle rotture del DNA a singolo e doppio filamento che si verificano nelle fasi iniziali dell′apoptosi.
Le cellule apoptotiche vengono fissate e permeabilizzate. In seguito, le cellule vengono incubate con la miscela di reazione TUNEL che contiene TdT e TMR-dUTP. Durante il periodo di incubazione, la TdT catalizza l′aggiunta di TMR-dUTP ai gruppi 3′-OH liberi nel DNA a singolo e doppio filamento. Dopo il lavaggio, la marcatura incorporata nei punti danneggiati del DNA viene visualizzata in citometria a flusso e/o in microscopia a fluorescenza.
Kit per il rilevamento e la quantificazione della morte cellulare apoptotica a livello di singola cellula mediante citometria a flusso e microscopia a fluorescenza e per la doppia marcatura con marcatori cellulari marcati con fluorescenza (TMR red)
Specificità
La reazione TUNEL marca preferenzialmente le rotture del filamento di DNA che si generano durante il processo di apoptosi. Ciò consente di distinguere l′apoptosi dalla necrosi e dalle rotture del filamento di DNA indotte mediante sostanze citostatiche o irradiazione.
Applicazioni
Il kit per il rilevamento della morte cellulare in situ con TMR red, è stato utilizzato nel saggio TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick End Labelling). È stato utilizzato nel test di rilevamento dell'apoptosi.
Tecnica precisa, veloce e semplice, per rilevare e quantificare la frammentazione del DNA apoptotico a livello di singola cellula in cellule e tessuti mediante una marcatura fluorescente rossa rilevabile sia in microscopia a fluorescenza che in citometria a flusso.
Confezionamento
1 kit contenente 2 componenti.
Nota sulla preparazione
Concentrazione di lavoro: concentrazione enzimatica
La concentrazione enzimatica ottimale per ogni saggio è compresa tra 0,5 e 5U Si consiglia di utilizzare 2 U di miscela enzimatica per una PCR standard da 50 μL, .
Soluzione di lavoro: per ottenere 500 μL di miscela di reazione TUNEL, aggiungere il volume totale (50 μL) di soluzione enzimatica ai restanti 450 μL di soluzione di marcatura
Mescolare bene per equilibrare i componenti
Condizioni di conservazione (soluzione di lavoro): la miscela di reazione TUNEL deve essere preparata immediatamente prima dell'uso e non deve essere conservata. Conservare le miscela di reazione TUNEL in ghiaccio fino all′utilizzo.
La concentrazione enzimatica ottimale per ogni saggio è compresa tra 0,5 e 5U Si consiglia di utilizzare 2 U di miscela enzimatica per una PCR standard da 50 μL, .
Soluzione di lavoro: per ottenere 500 μL di miscela di reazione TUNEL, aggiungere il volume totale (50 μL) di soluzione enzimatica ai restanti 450 μL di soluzione di marcatura
Mescolare bene per equilibrare i componenti
Condizioni di conservazione (soluzione di lavoro): la miscela di reazione TUNEL deve essere preparata immediatamente prima dell'uso e non deve essere conservata. Conservare le miscela di reazione TUNEL in ghiaccio fino all′utilizzo.
La miscela di reazione TUNEL viene preparata mescolando la soluzione enzimatica e la soluzione di marcatura prima dell'uso.
Solo come componenti del kit
N° Catalogo
Descrizione
- Enzyme Solution (TdT)
- Label Solution (TMR-dUTP)
Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
Codice della classe di stoccaggio
6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 3
Punto d’infiammabilità (°F)
does not flash
Punto d’infiammabilità (°C)
does not flash
Certificati d'analisi (COA)
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