PFHYS1008

Millicell^® HY Fiasca per colture multistrato

T-1000, 5 layer, 200-300 mL, sterile, vented cap, Tissue Culture (TC)-treated surface

• Sinonimo/i: coltura cellulare, coltura di tessuti, fiasca multi-strato, fiasca per colture cellulari
• Codice UNSPSC: 41104923
• eCl@ss: 32011202
• NACRES: NB.22

Proprietà

• Materiali: high-density polyethylene cap; polystyrene flask
• Livello qualitativo: 200
• Sterilità: sterile; γ-irradiated
• Caratteristiche: 5 layer
• Confezionamento: pack of 8
• Produttore/marchio commerciale: Millicell^®
• Parametri: 45 °C max. temp.
• tecniche: cell culture | mammalian: suitable
• Altezza: 51 mm , excluding cap; 74 mm , including cap
• Lunghezza: 22.2 cm
• Larghezza: 12 cm
• Area superficiale: 1000 cm²
• Volume d’esercizio: 200-300 mL
• Tipo di binding: Tissue Culture (TC)-treated surface
• Condizioni di spedizione: ambient

Descrizione

Nota sulla preparazione

1. Per inoculare le cellule, riempire la fiasca Millicell HY T-1000 con il mezzo di coltura prescelto.
2. Aggiungere il numero di cellule adeguato a raggiungere la densità di inoculo convenzionale.
3. Sollevando l′estremità della fiasca e pipettando la soluzione su e giù un certo numero di volte, miscelare cellule e terreno fino ad ottenere una sospensione omogenea. N.B: Una miscelazione inadeguata delle cellule, che non produca cioè una sospensione omogenea, può dare luogo ad una distribuzione non uniforme delle cellule tra gli strati della fiasca Millicell HY.
4. Appoggiare sul fianco per un breve lasso di tempo la fiasca, così da distribuire in maniera bilanciata il volume del liquido tra gli strati della fiasca.
5. Inclinare la fiasca alla sua estremità per ripartire il volume del liquido in ogni strato della fiasca stessa.
6. Adagiare in piano la fiasca per spandere in maniera uniforme la sospensione di cellule su tutta la superficie di ogni singolo strato.
7. In base al volume, potrebbe rivelarsi necessario scuotere la fiasca oscillandola verso i quattro angoli, per assicurarsi che tutta la superficie di ogni strato risulti bagnata. N.B: Se, nel corso del processo di bagnatura, il volume del liquido in uno qualsiasi degli strati dovesse cambiare (p.es. per la tracimazione di liquido dallo strato superiore a quelli sottostanti) occorre ripetere i passaggi 4–6 per assicurarsi la distribuzione uniforme del liquido tra tutti gli strati.
8. Ricollocare in posizione verticale la fiasca allorché la si trasferisce all′incubatore. Appoggiare la fiasca nell′incubatore (come al punto 6) e procedere alla coltura delle cellule nelle condizioni richieste.
9. Qualora risulti necessario un cambio del terreno, aspirare o versare il terreno dalla fiasca Millicell HY T-1000. N.B: A causa dell′ampia estensione superficiale delle fiasche Millicell, dopo ogni aspirazione potrebbe essere necessario lasciar decantare la fiasca sul lato per alcuni minuti in modo che il liquido residuo si raccolga tutto insieme, per poterlo poi rimuoverlo completamente con una seconda aspirazione.
10. Aggiungere un volume congruo di terreno fresco e ripetere i passaggi 4–8.
11. Per la raccolta delle cellule, rimuovere il terreno come al punto 9.
12. Aggiungere nella fiasca la quantità desiderata di soluzione di lavaggio (p.es. PBS o EDTA allo 0,02 %) e ripetere i passaggi 4–7.
13. Rimuovere la soluzione di lavaggio come al punto 9.
14. Per il distacco delle cellule, aggiungere la quantità desiderata di enzima di proteolisi (p.es. tripsina/EDTA allo 0,25 % o equivalente) secondo il protocollo prescelto, ripetere i passaggi 4–8 e incubare. Il volume di enzima proteolitico necessario per cm² non deve essere diverso da quanto previsto dal protocollo per le T-flask. N.B: Assicurarsi che tutte le cellule si siano distaccate completamente dalla superficie della fiasca mediante osservazione al microscopio. Il mancato completamento del distacco delle cellule dalla superficie di coltura (di modo che tutte le cellule risultino libere in sospensione) può determinare una riduzione della resa cellulare
15. Nel caso di impiego di tripsina, aggiungere volume adeguato di soluzione di inattivazione, come per esempio un terreno contenente siero.
16. Raccogliere le cellule per aspirazione o per travaso, come al punto 9.

Note legali

Millicell is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 10-13 - German Storage Class 10 to 13