OP46

mAb anti-MDM2 (Ab-1) murino (IF2)

liquid, clone IF2, Calbiochem^®

• Sinonimo/i: Anti-cromosoma minuto doppio-2 murino, anti-ubiquitina-proteina ligasi, anti-proteina legante p53
• Codice UNSPSC: 12352203
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Origine biologica: mouse
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: purified antibody
• Tipo di anticorpo: primary antibodies
• Clone: IF2, monoclonal
• Stato: liquid
• contiene: ≤0.1% sodium azide as preservative (100 μg only)
• Reattività contro le specie: human
• Non deve reagire con: mouse
• Produttore/marchio commerciale: Calbiochem^®
• Condizioni di stoccaggio: do not freeze
• Isotipo: IgG2b
• Condizioni di spedizione: wet ice
• Temperatura di conservazione: 2-8°C
• modifica post-traduzionali bersaglio: unmodified
• Informazioni sul gene: human ... MDM2(4193) ; mouse ... Mdm2(17246)

Descrizione

Descrizione generale

Anticorpo monoclonale murino purificato (consultare le referenze di applicazione). Riconosce la proteina MDM2 da ~90 kDa (peso molecolare apparente). Riconosce anche le isoforme da ~57 e ~74/76 kDa.

Questo anticorpo anti-MDM2 (Ab-1) murino monoclonale (IF2) è validato per l′uso in: sezioni congelate, immunofissazione, immunofluorescenza, immunoprecipitazione, sezioni in paraffina per il rilevamento di MDM2 (Ab-1).

Riconosce la proteina MDM2 da ~90 kDa (peso molecolare apparente). Riconosce anche le isoforme da ~57 kDa e ~74/76 kDa mediante immunofissazione.

Immunogeno

Epitopo: all′interno degli amminoacidi 26-169 della MDM2 umana

MDM2 umana

Umano

Applicazioni

Sezioni congelate (1-5 µg/ml, consultare le referenze di applicazione)

Immunofissazione (0,5-2 µg/ml, chemiluminescenza)

Immunofluorescenza (1-5 µg/ml)

Immunoprecipitazione (1 µg/campione)

Sezioni in paraffina (1-5 µg/ml, richiesto pre-trattamento termico, consultare le referenze di applicazione)

Confezionamento

Per la concentrazione specifica del lotto, fare riferimento all′etichetta del flaconcino.

Attenzione

Tossicità: Manipolazione standard (A)

Stato fisico

In 50 mM di tampone sodio fosfato, gelatina allo 0,2%.

Risultati analitici

Controllo positivo
Cellule OSA-CL

Altre note

Gorgoulis, V.G., et al. 1996. J. Pathol.180, 129.
Marchetti, A., et al. 1995. J. Pathol.175, 31.
Barak, Y., et al. 1993. EMBO J.12, 461.
Ladanyi, M., et al. 1993. Cancer Res.53, 16.
Leach, F.S., et al. 1993. Cancer Res.53, 2231.
Oliner, J.D., et al. 1993. Nature362, 857.
Momand, J., et al. 1992. Cell69, 1237.
Oliner, J.D., et al. 1992. Nature358, 80.
Fakharzadeh, S.S., et al. 1991. EMBO J. 10, 1565.

Sebbene la sequenza amminoacidica della MDM2 preveda una proteina con massa molecolare di circa 54 kDa, la proteina MDM2 migra su SDS/PAGE con una mobilità apparente di 90 kDa.



Protocollo di immunofissazione

La MDM2 (Ab-1) può essere utilizzata per rilevare la MDM2 con la metodica Western blot su proteine precedentemente separate mediante SDS/PAGE e trasferite con elettroforesi su membrane di nitrocellulosa. Le proteine vengono fatte reagire con l′anticorpo monoclonale e vengono visualizzate utilizzando un anticorpo di capra anti-topo coniugato con HRP con il rilevamento chemiluminescente.



Materiali

Apparecchiature:

• Apparato per elettroforesi

• Apparato per elettroblotting

• Piattaforma oscillante



Soluzioni e reagenti

• Anticorpo anti-MDM2 (Ab-1) monoclonale murino (IF2) Cat. N. OP46 o OP46T

• Anticorpo IgG di capra anti-topo a catene pesanti e leggere coniugato con HRP (ad es. Cat. N. 401215)

• Sistema di rilevamento con chemiluminescenza

• Tampone ELB (include un cocktail di inibitori delle proteasi, quali 0,5 µg/ml di leupeptina, 1 µg/ml di pepstatina, 1 mM di EDTA e 0,2 mM di PMSF): 50 mM di Hepes pH 7,0, 250 mM di NaCl, 0,5 mM di EDTA, 0,1% di Nonidet P-40 Alternative

• SDS-PAGE (7% di acrilammide)

• Tampone fosfato salino (PBS) pH 7,4; 1 litro: 0,2 g di KCl, 0,2 g di KH₂PO₄, 8 g di NaCl, 1,15 g di Na₂HPO₄

• PBS/0,1% di detergente Tween^®-20 (PBST)

• Latte secco senza grassi al 3% in PBST



Procedura

1. Lisare le cellule nel tampone ELB (in alternativa, le cellule possono essere lisate nel tampone RIPA o direttamente nel tampone per campioni Laemmli 1x).

2. Sottoporre a elettroforesi 50-100 µg di lisato utilizzando un gel con acrilammide al 7%.

3. Trasferire i campioni di proteine dal gel di poliacrilammide a una membrana in nitrocellulosa, servendosi di un apparato per elettroblotting.

4. Bloccare la membrana per un′ora nel PBST contenente il 3% di latte secco senza grassi a temperatura ambiente, facendola oscillare. Utilizzare circa 1 ml per cm² di membrana.

5. Incubare la membrana con 1 µg/ml di anticorpo anti-MDM2 (Ab-1) murino monoclonale (IF2) in 3% di latte secco senza grassi/PBST per un′ora a temperatura ambiente, facendola oscillare.

6. Lavare la membrana 3 volte, ogni volta per 15 minuti, nel PBST a temperatura ambiente, facendola oscillare.

7. Incubare la membrana con l′anticorpo IgG di capra anti-topo a catene pesanti e leggere coniugato con HRP, diluito secondo le istruzioni del produttore, in 3% di latte secco senza grassi/PBST per un′ora a temperatura ambiente.

8. Lavare la membrana 4 volte, ogni volta per 15 minuti, nel PBST a temperatura ambiente, facendola oscillare.

9. Sviluppare la membrana utilizzando i reagenti per rilevamento chemiluminescente secondo le istruzioni del produttore.

10. Esporre la membrana alla pellicola per dieci minuti. Regolare i successivi tempi di esposizione secondo necessità.

Note legali

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 10 - Combustible liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): nwg
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable