ECM205
Kit di screening ECM Millicoat®, 1 pz. ECM101-ECM105
Millicoat®, pkg of 96-well plate(s) (for fibronectin, vitronectin, laminin, collagen I & collagen IV)
Sinonimo/i:
Formerly under the CytoMatrix brand name.
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352202
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.77
Prodotti consigliati
Reattività contro le specie
human
Livello qualitativo
Produttore/marchio commerciale
Chemicon®
Millicoat®
Confezionamento
pkg of 96-well plate(s) (for fibronectin, vitronectin, laminin, collagen I & collagen IV)
tecniche
activity assay: suitable
cell based assay: suitable
input
sample type neural stem cell(s)
sample type: human embryonic stem cell(s)
sample type: mouse embryonic stem cell(s)
sample type epithelial cells
sample type hematopoietic stem cell(s)
sample type pancreatic stem cell(s)
sample type induced pluripotent stem cell(s)
sample type mesenchymal stem cell(s)
Metodo di rivelazione
colorimetric
Condizioni di spedizione
wet ice
Descrizione generale
L′adesione cellulare riveste un ruolo centrale nella comunicazione tra le cellule e nella loro regolazione ed è di importanza fondamentale nello sviluppo e nel mantenimento dei tessuti. Un campo di interesse per i ricercatori è rappresentato dai processi di adesione, migrazione e invasione di molti diversi tipi cellulari su svariate proteine che compongono la matrice extracellulare (ECM). Le strisce di adesione cellulare Millicoat® sono fornite come 12 strisce rimovibili da 8 pozzetti in un telaio per piastre, per una maggiore praticità e flessibilità nella progettazione dei saggi. I pozzetti delle file A - G sono stati rivestiti con proteina ECM umana. La riga H di ciascuna striscia è rivestita con BSA, che funge da controllo negativo del test. Il kit di screening Millicoat contiene piastre individuali da 96 pozzetti per fibronectina, vitronectina, laminina, collagene I e collagene IV. Le cellule vengono seminate sul substrato rivestito. Successivamente, le cellule aderenti vengono fissate e colorate. L′adesione cellulare relativa si calcola utilizzando misurazioni di assorbanza.
Applicazioni
Categoria di ricerca
Struttura cellulare
Struttura cellulare
Il kit di screening Millicoat® contiene piastre individuali da 96 pozzetti per fibronectina, vitronectina, laminina, collagene I e collagene IV.
Procedura:
NOTA: Le prestazioni ottimali del test si ottengono utilizzando colture cellulari subconfluenti. Questo risultato può essere ottenuto dividendo le cellule da 1 a 2 giorni prima dell'esecuzione del test.
1. Reidratare le strisce con 200 mL di PBS per pozzetto per almeno 15 minuti a temperatura ambiente. Rimuovere il PBS dalle strisce reidratate.
2. Preparare una sospensione monocellulare, preferibilmente utilizzando un tampone di dissociazione non enzimatico. La densità cellulare ottimale può essere determinata mediante titolazione delle cellule. Un intervallo di partenza comune è compreso tra 1x10E05 e 1x10E07 cellule/mL.
3. Aggiungere 100 mL della sospensione cellulare diluita in ogni pozzetto. Incubare la piastra per 37 °C per 1 ora nell'incubatore a CO2. Lavare delicatamente la piastra 3 volte con PBS contenente Ca2+/Mg2+ (200 mL/pozzetto).
4. Aggiungere 100 mL di cristalvioletto allo 0,2% in etanolo al 10% in ogni pozzetto. Incubare per 5 minuti a temperatura ambiente. Rimuovere il colorante dai pozzetti. Lavare delicatamente la piastra 3 volte con PBS (300 mL/pozzetto).
5. Aggiungere 100 mL di tampone di solubilizzazione (una miscela 50/50 di NaH2PO4 0,1M a pH 4,5 e 50% di etanolo) a ciascun pozzetto. Lasciare incubare le strisce e agitare delicatamente a temperatura ambiente fino alla completa solubilizzazione del colorante legato alle cellule; ci vorranno circa 5 minuti.
6. Determinare l'assorbanza a 540 - 570 nm utilizzando un lettore di micropiastre.
NOTA: Le prestazioni ottimali del test si ottengono utilizzando colture cellulari subconfluenti. Questo risultato può essere ottenuto dividendo le cellule da 1 a 2 giorni prima dell'esecuzione del test.
1. Reidratare le strisce con 200 mL di PBS per pozzetto per almeno 15 minuti a temperatura ambiente. Rimuovere il PBS dalle strisce reidratate.
2. Preparare una sospensione monocellulare, preferibilmente utilizzando un tampone di dissociazione non enzimatico. La densità cellulare ottimale può essere determinata mediante titolazione delle cellule. Un intervallo di partenza comune è compreso tra 1x10E05 e 1x10E07 cellule/mL.
3. Aggiungere 100 mL della sospensione cellulare diluita in ogni pozzetto. Incubare la piastra per 37 °C per 1 ora nell'incubatore a CO2. Lavare delicatamente la piastra 3 volte con PBS contenente Ca2+/Mg2+ (200 mL/pozzetto).
4. Aggiungere 100 mL di cristalvioletto allo 0,2% in etanolo al 10% in ogni pozzetto. Incubare per 5 minuti a temperatura ambiente. Rimuovere il colorante dai pozzetti. Lavare delicatamente la piastra 3 volte con PBS (300 mL/pozzetto).
5. Aggiungere 100 mL di tampone di solubilizzazione (una miscela 50/50 di NaH2PO4 0,1M a pH 4,5 e 50% di etanolo) a ciascun pozzetto. Lasciare incubare le strisce e agitare delicatamente a temperatura ambiente fino alla completa solubilizzazione del colorante legato alle cellule; ci vorranno circa 5 minuti.
6. Determinare l'assorbanza a 540 - 570 nm utilizzando un lettore di micropiastre.
Stoccaggio e stabilità
Può essere conservato a 2-8 °C nella busta di alluminio per almeno 3 mesi. Le strisce inutilizzate possono essere nuovamente riposte e conservate nella busta laminata. Accertarsi che l′essiccante sia sempre nella busta e che questa sia correttamente sigillata.
Note legali
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
MILLICOAT is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Esclusione di responsabilità
Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.
Codice della classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
Certificati d'analisi (COA)
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