D4513

Désoxyribonucléase I from bovine pancreas

Type II-S, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein

• Synonyme(s) : DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
• Numéro CAS: 9003-98-9
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-667-0
• Numéro MDL: MFCD00130918
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: bovine pancreas
• Niveau de qualité: 300
• Stérilité: sterile-filtered
• Type: Type II-S
• Forme: lyophilized powder
• Activité spécifique: ≥2,000 units/mg protein
• Poids mol.: ~31 kDa
• Produit purifié par: chromatography
• Composition: Protein, ≥80%
• Conditionnement: vial of ≥10.0 mg protein
• Technique(s): DNA purification: suitable
• Impuretés: endotoxin, tested
• Solubilité: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear(lit.)
• Adéquation: suitable for molecular biology
• Application(s): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• Activité étrangère: Chymotrypsin ≤0.01%; Protease ≤0.005%; RNase ≤0.01%
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

La DNAse I de Sigma a été comparée à un inhibiteur de l'interleukine 1 dérivé d'urine humaine quant à leur capacité à hydrolyser l'ADN[¹⁴C]. Elle a également été utilisée pour cliver un fragment de restriction Hind III/Nci I de 139 paires de bases afin d'étudier sa stabilité dans des expériences de footprinting. La DNase I est très utilisée comme agent de footprinting pour l'étude de la liaison de médicaments et de protéines à l'ADN.

La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée dans une étude sur une nouvelle technique d'obtention de RNase, de DNase, de cholestérolestérase et de trypsine hautement actives à partir de pancréas de bovin. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude portant sur l'isolement puis la caractérisation de DNase de foie de carpe.

Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

Actions biochimiques/physiologiques

La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester adjacentes à des pyrimidines et qui produit des polynucléotides ayant des groupements 5′-phosphate terminaux. En présence de Mg²⁺, la DNase I clive indépendamment chaque brin d'ADN et les sites de clivage sont aléatoires. Les deux brins d'ADN sont clivés approximativement au niveau du même site en présence de Mn²⁺. Le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ et Zn²⁺ sont des activateurs de cette enzyme. Une concentration en Ca²⁺ de 5 mM la stabilise vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase I de pancréas de bovin est constituée de quatre éléments, A, B, C et D, qui peuvent être distingués par chromatographie. Le rapport molaire des éléments A, B et C est de respectivement 4:1:1. L'élément D est présent en très faible quantité. Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l'actine sont connus pour inhiber l'activité de cette enzyme.

Définition de l'unité

Une unité Kunitz produit une ΔA₂₆₀ de 0,001 par minute et par millilitre, à pH 5,0 et à 25 °C, avec de l'ADN de type I ou III comme substrat. (1 unité = 1 unité Kunitz)

Forme physique

Poudre lyophilisée contenant du chlorure de calcium

Notes préparatoires

La poudre d'enzyme peut être reconstituée dans de l'eau ou tout tampon de pH 4,0 à 9,0, à l'exception des tampons phosphates. Les chélateurs de calcium doivent être évités. Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu'elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d'activité peut être d'environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active pendant 5 heures maximum à 60 °C entre pH 5 et pH 7 et devient inactive après moins de 10 minutes à 68 °C. Sa perte d'activité est de 6 % par heure dans un tampon acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.

Remarque sur l'analyse

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

Autres remarques

Lauréat du prix CiteAb 2024 récompensant les avancées des fournisseurs dans la recherche sur la maladie de Parkinson

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H334
• Conseils de prudence: P261 - P284 - P501
• Classification des risques: Resp. Sens. 1
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 3
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)