MAB351R
Anticorps anti-glutamate décarboxylase, isoforme de 65 kDa, clone GAD-6
clone GAD-6, Chemicon®, from mouse
Synonyme(s) :
GAD65
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About This Item
Code UNSPSC :
12352203
eCl@ss :
32160702
Nomenclature NACRES :
NA.41
Produits recommandés
Source biologique
mouse
Niveau de qualité
Forme d'anticorps
purified immunoglobulin
Type de produit anticorps
primary antibodies
Clone
GAD-6, monoclonal
Espèces réactives
human, rat
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
Technique(s)
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
Isotype
IgG2a
Numéro d'accès NCBI
Numéro d'accès UniProt
Conditions d'expédition
dry ice
Modification post-traductionnelle de la cible
unmodified
Informations sur le gène
human ... GAD2(2572)
Description générale
L'acide glutamique décarboxylase (GAD, n° E.C. 4.1.1.15) est l'enzyme responsable de la conversion de l'acide glutamique en acide gamma-aminobutyrique (GABA), principal transmetteur inhibiteur au sein des régions cérébrales supérieures, et hormone paracrine putative des îlots de Langerhans. Deux formes moléculaires de la GAD (65 kDa et 67 kDa, dont les a.a. sont identiques à 64 %) sont largement conservées, et toutes deux sont exprimées dans le SNC, les cellules des îlots de Langerhans, le testicule, la trompe utérine et l'ovaire. Les isoformes sont réparties régionalement dans le cytoplasme des cerveaux de rat et de souris (Sheikh, S. et al. 1999). La GAD65 est une protéine amphiphile à ancrage membranaire (de 585 a.a.), codée sur le chromosome 10 humain, qui est responsable de la production de GABA au niveau vésiculaire. La GAD67 est une protéine cytoplasmique (de 594 a.a.), codée sur le chromosome 2, qui semble responsable d'une production importante de GABA au niveau cytoplasmique. L'expression de la GAD change au cours du développement nerveux dans la moelle épinière du rat. La GAD65 est exprimée de manière transitoire dans les axones commissuraux autour de E13, mais est régulée à la baisse le lendemain tandis que l'expression de la GAD67 augmente essentiellement dans le soma de ces neurones (Phelps, P. et al. 1999). Dans le pancréas mature du rat, la GAD65 et la GAD67 semblent être localisées à différents endroits, la GAD65 se concentrant principalement dans les cellules bêta contenant de l'insuline et la GAD67 dans les cellules (A) contenant du glucagon (Li, L. et al. 1995). L'expression de la GAD67 semble être particulièrement plastique et peut évoluer en réponse à une manipulation expérimentale (par exemple une stimulation ou une transection neuronale) ou à la progression d'une maladie et à des troubles émergents comme la schizophrénie (Volk et al., 2000). La colocalisation des deux isoformes de la GAD indique également des modifications au niveau de la répartition de la GAD65 et de la GAD67 qui sont corrélées à certains états pathologiques du type DID (diabète insulino-dépendant) ou SMS.
Spécificité
Reconnaît l'isoforme de poids moléculaire le plus bas des deux isoformes de la GAD identifiées dans le cerveau (Gottlieb, et al., 1986 ; Chang and Gottlieb, 1988). Cet anticorps monoclonal peut être utilisé à des fins de localisation immunohistochimique dans le cerveau ou le pancréas. L'anticorps anti-GAD a également été utilisé pour marquer la GAD purifiée lors d'analyses par western blotting (Chang and Gottlieb, 1988).
Immunogène
GAD de cerveau de rat purifiée.
Application
Domaine de recherche
Neurosciences
Neurosciences
Immunohistochimie : (≤ 1 µg/ml). Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.
Procédures de coloration immunohistochimique
La procédure suivante a été développée pour localiser la GAD dans des coupes de cervelet de rat. Sauf indication contraire, exécutez toutes les étapes à température ambiante. Lorsqu'un sérum normal est indiqué, utilisez du sérum normal de la même espèce que la source de l'anticorps secondaire. Cette procédure respecte les recommandations d'utilisation de l'anticorps anti-GAD. Pour un système expérimental en particulier, le mode de fixation, les concentrations d'anticorps et les conditions d'incubation doivent être déterminés de manière empirique.
1. Perfuser les rats avec un tampon phosphate 100 mM (pH 7,4) contenant 1 % de paraformaldéhyde, 0,34 % de L-lysine et 0,05 % de m-periodate de sodium (PLP à 1 %).
2. Post-fixer les cerveaux dans la solution de PLP à 1 % pendant 1 à 2 heures. Des temps de fixation plus longs peuvent réduire l'intensité du marquage.
3. Transférer les cerveaux dans un tampon phosphate 100 mM contenant 30 % de saccharose et agiter doucement sur un agitateur à plateforme à +4 °C pendant 48 à 60 heures.
4. À l'aide d'un microtome à glissière, débiter des coupes de 30 mm de cervelet congelé. Au fur et à mesure que les coupes sont débitées, les placer dans un flacon de tampon phosphate 100 mM froid.
5. Incuber les coupes dans un tampon phosphate salin (PBS) contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100 pendant 30 minutes.
6. Sur un agitateur à plateforme, incuber les coupes avec l'anticorps anti-GAD (dilué dans du PBS contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100, pour une concentration finale d'anticorps de 1 mg/ml) pendant 12 à 36 heures à +4 °C.
7. Sur un agitateur à plateforme, rincer les coupes huit fois dans du PBS pendant 10 à 15 minutes par rinçage.
8. Procéder à la détection à l'aide d'un système de détection d'anticorps standard (Hsu et al., 1981; Falini et Taylor, 1983 ; Harlow et Lane, 1988 ; Taylor, 1978).
9. Monter les coupes, les déshydrater et poser les lamelles.
Procédures de coloration immunohistochimique
La procédure suivante a été développée pour localiser la GAD dans des coupes de cervelet de rat. Sauf indication contraire, exécutez toutes les étapes à température ambiante. Lorsqu'un sérum normal est indiqué, utilisez du sérum normal de la même espèce que la source de l'anticorps secondaire. Cette procédure respecte les recommandations d'utilisation de l'anticorps anti-GAD. Pour un système expérimental en particulier, le mode de fixation, les concentrations d'anticorps et les conditions d'incubation doivent être déterminés de manière empirique.
1. Perfuser les rats avec un tampon phosphate 100 mM (pH 7,4) contenant 1 % de paraformaldéhyde, 0,34 % de L-lysine et 0,05 % de m-periodate de sodium (PLP à 1 %).
2. Post-fixer les cerveaux dans la solution de PLP à 1 % pendant 1 à 2 heures. Des temps de fixation plus longs peuvent réduire l'intensité du marquage.
3. Transférer les cerveaux dans un tampon phosphate 100 mM contenant 30 % de saccharose et agiter doucement sur un agitateur à plateforme à +4 °C pendant 48 à 60 heures.
4. À l'aide d'un microtome à glissière, débiter des coupes de 30 mm de cervelet congelé. Au fur et à mesure que les coupes sont débitées, les placer dans un flacon de tampon phosphate 100 mM froid.
5. Incuber les coupes dans un tampon phosphate salin (PBS) contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100 pendant 30 minutes.
6. Sur un agitateur à plateforme, incuber les coupes avec l'anticorps anti-GAD (dilué dans du PBS contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100, pour une concentration finale d'anticorps de 1 mg/ml) pendant 12 à 36 heures à +4 °C.
7. Sur un agitateur à plateforme, rincer les coupes huit fois dans du PBS pendant 10 à 15 minutes par rinçage.
8. Procéder à la détection à l'aide d'un système de détection d'anticorps standard (Hsu et al., 1981; Falini et Taylor, 1983 ; Harlow et Lane, 1988 ; Taylor, 1978).
9. Monter les coupes, les déshydrater et poser les lamelles.
L'anticorps anti-glutamate décarboxylase, isoforme de 65 kDa, clone GAD-6, est un anticorps dirigé contre la glutamate décarboxylase, destiné à une utilisation en immunohistochimie et western blotting.
Sous-domaine de recherche
Neurotransmetteurs et récepteurs
Neurotransmetteurs et récepteurs
Description de la cible
65 kDa
Forme physique
Format : Produit purifié
Produit lyophilisé. Dissoudre le contenu de la fiole dans 100 µl d'eau distillée stérile. Le résultat obtenu est une concentration finale d'anticorps de 1 mg/ml dans du phosphate de potassium 10 mM, du chlorure de sodium 70 mM, pH 7,4, sans agent de conservation.
Précipitation au sulfate d'ammonium et chromatographie sur DEAE-cellulose
Stockage et stabilité
À conserver à -20 °C pendant 1 an à compter de la date d'expédition. À diviser en aliquotes pour éviter les congélations et décongélations répétées. Pour récupérer le maximum de produit, centrifuger le flacon d'origine après décongélation et avant de retirer le capuchon.
Remarque sur l'analyse
Témoin
Tissu cérébral
Tissu cérébral
Autres remarques
Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Clause de non-responsabilité
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Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Warning
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3
Code de la classe de stockage
13 - Non Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Certificats d'analyse (COA)
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Diminished neurosteroid sensitivity of synaptic inhibition and altered location of the alpha4 subunit of GABA(A) receptors in an animal model of epilepsy.
Sun, C; Mtchedlishvili, Z; Erisir, A; Kapur, J
The Journal of Neuroscience null
Time-resolved fluorometric assay for detection of autoantibodies to glutamic acid decarboxylase (GAD65).
Matti Ankelo, Annette Westerlund-Karlsson, Jorma Ilonen, Mikael Knip, Kaisa Savola et al.
Clinical Chemistry null
Galanin receptor 1 is expressed in a subpopulation of glutamatergic interneurons in the dorsal horn of the rat spinal cord.
Marc Landry, Rabia Bouali-Benazzouz, Caroline Andre, Tie Jun Sten Shi, Claire Leger et al.
The Journal of Comparative Neurology null
Anatomy of glutamic acid decarboxylase immunoreactive neurons and axons in the rat medial geniculate body.
Winer, J A and Larue, D T
The Journal of Comparative Neurology, 278, 47-68 (1988)
Distribution of alpha1, alpha4, gamma2, and delta subunits of GABAA receptors in hippocampal granule cells.
Sun, C; Sieghart, W; Kapur, J
Brain Research null
Articles
Human iPSC neural differentiation media and protocols used to generate neural stem cells, neurons and glial cell types.
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