Description générale
La protéine ''mères contre l'homologue décapentaplégique 1'' (''Mothers against decapentaplegic homolog 1'', UniProt Q15797 ; aussi appelée BSP-1, hSMAD1, JV4-1, homologue MAD 1, mères contre l'homologue DPP 1, protéine liée à Mad 1, SMAD 1, membre 1 de la famille SMAD, Smad1, protéine de signalisation 1 pour la transformation du facteur de croissance bêta) est codée par le gène SMAD1 (aussi dénommé BSP1, MADH1 et MADR1 ; ID du gène : 4086) chez l'homme. Chez les mammifères, les SMAD constituent une famille de facteurs de transcription et se subdivisent en trois groupes. SMAD1, 2, 3, 5 et 9 (alias SMAD8) sont des SMAD régulées par des récepteurs ou R-SMAD. SMAD4 est le seul médiateur commun, ou Co-SMAD, connu chez les mammifères et il intervient dans les voies de signalisation à la fois du TGF et du BMP. SMAD6 et SMAD7 sont des SMAD inhibiteurs, ou I-SMAD, qui bloquent l'activation des R-SMAD par Co-SMAD en se liant de manière compétitive. Les SMAD partagent une structure similaire comprenant les domaines N-terminal Mad-homology 1 (MH1 ; a.a. 12-136 de hSMAD1, a.a. 13-137 de hSMAD2 ou a.a. 16-140 de hSMAD8) et C-terminal MH2 (a.a. 271-465 de hSMAD1 et hSMAD2 ou a.a. 273-467 de hSMAD8), reliés par une région de liaison non conservée parmi les SMAD. Le domaine MH1 des R-SMAD et Co-SMAD contient un signal de localisation nucléaire (NLS) N-terminal, tandis que SMAD4 porte des signaux d'exportation nucléaire (NES) dans ce domaine. Le domaine MH2 est responsable de la transactivation des gènes ainsi que de la médiation des interactions SMAD-récepteur, SMAD-SMAD, SMAD-coactivateurs et SMAD-corépresseurs. Un ligand TGF (TGF pour SMAD2/3 et BMP pour SMAD1/5/8) initie la signalisation en liant et en engageant les récepteurs de type I et de type II aux sérine/thréonines kinases en surface de la cellule. Cela permet la phosphorylation T RII-dépendante du domaine T RI de la kinase, qui déclenche ensuite la signalisation en phosphorylant les deux derniers résidus de sérine du motif C-terminal conservé Ser-Ser-X-Ser (SSXS) des protéines SMAD.
Spécificité
Cet anticorps polyclonal de lapin reconnaît les protéines SMAD1/5/8 phosphorylées sur les deux derniers résidus de sérine leur motif Ser-Ser-X-Ser (SSXS) à l'extrémité C-terminale. Des résidus de sérine cibles sont présents dans la SMAD1 humaine et de souris (S463/S465), la SMAD1 de rat (S466/S468), la SMAD5 humaine, de souris et de rat (S463/S465), la SMAD9 humaine (S465/S467), la SMAD9 de souris (S428/S430) et la SMAD9 de rat (S432/S434), mais ils sont absents de l'isoforme d'épissage 2 de la SMAD1 humaine. SMAD9 est aussi appelée SMAD8. La détection des bandes cibles a été bloquée par le phosphopeptide immunogène, mais pas par le peptide non-phosphorylé correspondant.
Immunogène
Peptide linéaire conjugué à la KLH et correspondant à la fin de la séquence C-terminale de la protéine SMAD1 humaine, phosphorylée sur les deux derniers résidus de sérine (S463/S465).
Épitope : extrémité C-terminale
Application
Analyse par immunohistochimie : une dilution au 1/50e d'un lot représentatif a permis de détecter la phosphorylation de Smad1/5/8 sur des coupes de tissus embryonnaires de rat et de souris.
Domaine de recherche
Épigénétique et fonction nucléaire
L'anticorps anti-phospho-Smad1/Smad5/Smad8 (Ser463/465), réf. AB3848-I, est un anticorps polyclonal de lapin hautement spécifique qui cible la forme phosphorylée de Smad1/5/8, et dont l'utilisation a été testée en immunohistochimie et en western blotting.
Qualité
Produit évalué par western blotting sur des lysats de cellules HEK293.
Analyse par western blotting : une dilution au 1/500e de cet anticorps a permis de détecter une augmentation de la phosphorylation de SMAD1/5/8 dans 10 µg de lysat de cellules HEK293 traitées au BMP2. La détection des bandes cibles a été bloquée par le phosphopeptide immunogène, mais pas par le peptide non-phosphorylé correspondant.
Description de la cible
Poids réel (observé) : env. 55 kDa. Dans certains lysats, on observe des bandes SMAD1 à 52,26, 52,16 et 52,71 kDa (homme, souris et rat, resp.), des bandes SMAD5 à 52,26, 52,17 et 52,22 kDa (homme, souris et rat, resp.) et des bandes non caractérisées à 52,49, 48,64 et 48,99 kDa.
Forme physique
Anticorps polyclonal de lapin purifié, dans un tampon contenant 0,1 M de Tris-glycine (pH 7,4), 150 mM de NaCl et 0,05 % d'azoture de sodium.
Produit purifié par affinité.
Stockage et stabilité
Stable entre 2 et 8 °C pendant 1 an à compter de la date de réception.
Autres remarques
Concentration : voir la fiche technique du lot concerné.
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