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Aufreinigung von biotinylierten Proteinen

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Cytiva HiTrap™ Streptavidin Sepharose-HP-Aufreinigungssäulen und Harze.
Aufreinigung von rekombinanten Proteinen mit Hilfe der Affinitätschromatographie.
Magnetische Beads in Röhrchen im Gestell für die Proteinaufreinigung
PureProteome™ Produkte aus magnetischen Beads für die Proteinaufreinigung

Biotinylierte Proteine und biotinylierte Antikörper werden häufig in der Grundlagenforschung und der Arzneimittelforschung eingesetzt. Für die Bindung, Isolierung und Aufreinigung von biotinylierten Proteinen und Antikörpern stehen verschiedene Affinitätschromatographieharze sowie vorgepackte Säulen und Platten zur Verfügung.

Agarose-Beads und Affinitätsgele

Agarose-Beads und Affinitätsgele ermöglichen die Aufreinigung von biotinylierten Proteinen und biotinylierten Antikörpern mit Hilfe von Streptavidin oder Avidin, die mit Agarose-Beads vernetzt sind. Sowohl Avidin als auch Streptavidin binden mit hoher Affinität an Biotin, obwohl Avidin eine hohe unspezifische Bindung aufweisen kann. In Extravidin® Agarose wird ein modifiziertes Avidin mit sehr hoher Affinität und Spezifität für Biotin eingesetzt. Diese Harze eignen sich für die Säulenaufreinigung im Schwerkraftverfahren, für die Zentrifugation bei niedriger Geschwindigkeit im Batch-Verfahren und für die Niederdruckchromatographie. Sie sind für die Aufreinigung im kleinen bis großen Maßstab geeignet. EZview™ Affinitätsgele enthalten einen roten Farbstoff, der es dem Benutzer ermöglicht, Pellet und Überstand leicht zu unterscheiden, was zu einem geringeren Proteinverlust während der Chargenaufreinigung führt.

Magnetische Beads

PureProteome™ magnetische Streptavidin-Beads bieten eine schnelle und reproduzierbare Möglichkeit zur Aufreinigung von Immunglobulinen aus komplexen Gemischen wie Serum, Plasma oder Zellkulturüberstandsproben. Biotinylierte Proteine und biotinylierte Antikörper werden mit Hilfe eines magnetischen Gestells oder einer Plattform aufgereinigt, um die Beads von Wasch- und Elutionsfraktionen zu trennen. Dieses Verfahren eignet sich für einen geringen Durchsatz unter Verwendung einzelner Mikrozentrifugenröhrchen oder für einen höheren Durchsatz unter Verwendung von 96-Well-Platten mit oder ohne Automatisierung. Magnetische Streptavidin-Partikel können auch für die Aufreinigung von biotinylierten Proteinen und biotinylierten Antikörpern verwendet werden.

SigmaScreen™ Streptavidin-beschichtete Platten mit hoher Kapazität

SigmaScreen™ Streptavidin-beschichtete Platten mit hoher Kapazität nutzen eine proprietäre Beschichtungstechnologie, die eine wesentlich höhere Biotin-Bindungskapazität bietet als standardmäßige Streptavidin- oder ExtrAvidin-beschichtete Platten. Mit einer Bindungskapazität von > 300 pmol/Well (96-Well-Format) bzw. > 150 pmol/Well (384-Well-Format) ermöglichen diese Platten die Elution des eingefangenen Proteins für die Analyse nach der Erfassung mit verschiedenen Methoden wie MALDI, ICAT oder SDS-PAGE. SigmaScreen™ Streptavidin-beschichtete Hochkapazitätsplatten werden unter Einhaltung der ISO 9002 in unserer GMP-Anlage hergestellt und bieten eine hohe Konsistenz von Well zu Well und Platte zu Platte.

Cytiva™ Amersham Chromatographiesäulen und -medien

Eine Vielzahl von Cytiva™ Amersham Chromatographiesäulen und Medienharzen sind für die zuverlässige, hochauflösende Aufreinigung von biotinylierten Proteinen und Antikörpern in kleinem bis großem Maßstab erhältlich.

  • SpinTrap™ Säulen sind vorgepackte Einweg-Spinsäulen für die einfache Aufreinigung von biotinylierten Proteinen und biotinylierten Antikörpern im kleinen Maßstab.
  • HiTrap™ HP-Säulen sind mit Streptavidin-Sepharose™ Hochleistungsharzen für die routinemäßige, präparative Aufreinigung von Proteinen und Antikörpern vorgepackt.
  • MultiTrap™ 96-Well-Filterplatten bieten ein schnelles, zuverlässiges Format für die Aufreinigung von biotinylierten Proteinen und Antikörpern im kleinen Maßstab unter Verwendung von vorgepackten 96-Well-Filterplatten, die manuell oder mit Hilfe automatisierter Robotersysteme zentrifugiert oder vakuumfiltriert werden können.
  • Streptavidin Mag Sepharose™ Medien bestehen aus magnetischen Beads auf Sepharose™ Basis, welche die Anreicherung von Zielproteinen durch Immunpräzipitation oder Pulldown-Anwendungen vereinfachen und für die schnelle Aufreinigung und das Screening von biotinylierten Proteinen und biotinylierten Antikörpern aus Zellüberständen im kleinen Maßstab verwendet werden können.
  • Streptavidin Sepharose™ Hochleistungsharz ist auch separat für die skalierte Aufreinigung erhältlich.

Zugehörige Produktressourcen

Broschüre: Refine Protein Preparation
Purification or Removal of Biotin and Biotinylated Substances

Zugehörige Produktkategorien
Rekombinante/Fusions-Tag-Proteinaufreinigung
Affinitätsreinigungsharze und -puffer für die Aufreinigung von His-markierten, GST-markierten, FLAG® markierten, S-tag™, Strep-Tag II- und T7-markierten Proteinen unter nativen oder denaturierenden Bedingungen mittels Chargen- oder Säulenaufreinigungstechniken.
Antikörper-Proteinaufreinigung
Antikörper-Aufreinigungsharze und vorgepackte Säulen für Arbeitsabläufe im Labor-, Prozess- und Industriemaßstab.
FLAG-Aufreinigung
Expressionsvektoren, Affinitätsharze und Antikörper für die Expression, Aufreinigung und den Nachweis von FLAG® markierten Fusionsproteinen.
Laborkonzentratoren
Zentrifugen- und druckgesteuerte Ultrafiltrationseinheiten für die Proteinkonzentration mit hoher Rückgewinnung und die Konzentration anderer biologischer und umfeldbezogener Proben zur Vorbereitung auf nachgeschaltete Anwendungen.
Labordialyse- & Diafiltrationseinheiten
Dialysatoren, Zentrifugen-Filtereinheiten für die Ultrafiltration und Rührzellen für Pufferaustausch, Dialyse, Entsalzung und Diafiltration von 10 µl - 1.200 ml Probenvolumen.
Amicon® Zentrifugeneinheiten
Zentrifugal- und druckgesteuerte Ultrafiltrationseinheiten für die Proteinkonzentration, Entsalzung, Pufferaustausch, Trennung und Diafiltration von biologischen und Umfeldproben zur Vorbereitung von Downstream-Anwendungen.
Centrifugal Filters
Filtration devices for concentration and preparation of biological and environmental samples for downstream processing.
Zugehörige Anwendungen
Proteinaufreinigung
Proteinaufreinigungsverfahren, Reagenzien und Protokolle zur Aufreinigung rekombinanter Proteine unter Anwendung von Methoden wie Ionenaustausch, Größenausschluss und Proteinaffinitätschromatographie.
Proteinexpression
Technologien zur Expression rekombinanter Proteine in E. coli-, Insekten-, Hefen- und Säuger-Expressionssystemen für die Grundlagenforschung und zur Unterstützung der Therapeutika- und Impfstoffproduktion.
Lyse & Proteinextraktion
Ein Überblick über Zelllyse- und Proteinextraktionsmethoden einschließlich Detergenzsolubilisierung, Gefrier-Auftau-Lyse, osmotischer Schock, Ultraschall, enzymatische Zelllyse und mechanische Homogenisierungsmethoden wie Dounce, Polytron und Mörser und Pistille.
Protein-Pulldown
Pulldown-Assays, Reagenzien und Protokolle zur Untersuchung von in vitro Protein-Protein-Interaktionen unter Verwendung von Affinitäts- oder GST-Pulldown, Tandem Affinity Purification (TAP) und Co-Immunpräzipitationsmethoden.
Proteinkonzentration & Pufferaustausch
Überblick über Methoden zur Konzentrierung und Klärung von Proteinproben für Aufreinigungs-, Bioprozess- und Analyseverfahren. Mit Protokollen und Videos zu Filtrations- und Ultrafiltrationstechniken, Proteinanreicherung, Entsalzung und Pufferaustausch mittels Dialyse, Diafiltration und Chromatographiemethoden.
Gelelektrophorese
Die Protein-Gelelektrophorese dient zur Trennung von Proteinen zu deren Aufreinigung, Charakterisierung und Detektion. Methoden wie native PAGE, SDS-PAGE, 2D-PAGE und isoelektrische Fokussierung (IEF) werden in Vorbereitung auf nachfolgende Anwendungen wie Western Blots, Massenspektrometrie und Proteomanalyse eingesetzt.
Western Blotting
Ein Überblick über die Grundsätze und Anwendungen des Western Blotting zum Nachweis von Proteinen. Enthält Links zu detaillierten Protokollen, Videos und anderen Ressourcen für die Proteinextraktion, die Gelelektrophorese, den Transfer auf PVDF- oder Nitrozellulose-Membranen sowie chemilumineszente, kolorimetrische und Fluoreszenznachweisverfahren.
Massenspektrometrie
Die Massenspektrometrie (MS) ist eine Analysentechnik zur Identifizierung von Verbindungen, Bestimmung der chemischen Struktur und Bewertung der Isotopenhäufigkeit. In der MS werden die Proben ionisiert und die resultierenden Ionen werden auf der Grundlage ihres Masse-zu-Ladungs-Verhältnisses (m/z) identifiziert.
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