C1889

Collagenase aus Clostridium histolyticum

0.2 μm filtered, suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV-S, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

• Synonym(e): Clostridiopeptidase A
• CAS-Nummer: 9001-12-1
• EC-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-582-9
• MDL-Nummer: MFCD00130830
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 200
• Sterilität: 0.2 μm filtered
• Typ: Type IV-S
• Form: powder
• Spezifische Aktivität: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• Mol-Gew.: 68-130 kDa
• Eignung: suitable for release of physiologically active rat hepatocytes
• Anwendung(en): diagnostic assay manufacturing
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Clostridium histolyticum besteht aus zwei Klassen von Kollagenasen; es spaltet an verschiedenen Stellen innerhalb des Kollagen-Dreifachhelix. Es ist effektiver als Säuger-Kollagenasen. Clostridiale Kollagenase ist am bakteriellen Befall von Gasbrand beteiligt.

Anwendung

Kollagenase aus Clostridium histolyticum wird zur Trennung von Gewebeproben, z. B. Milz- und Hodengewebe, verwendet.

Kollagenase wird bei der Präparation von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glycosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Das Enzym wird zusammen mit anderen Proteasen zur Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem Hirngewebe, Lungenepithelgewebe und vielen anderen Geweben verwendet. Außerdem ist es in Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau und bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Leberzellen wirkungsvoll. Dieses Enzym wurde auf seine Eignung für die Freisetzung von Leberzellen getestet. Die Kollagenase wird in einer Konzentration von ca. 1 mg/mL in einem Gesamtvolumen von 100 mL pro Rattenleber getestet.

Biochem./physiol. Wirkung

Eine wirkungsvolle Abgabe von Zellen aus dem Gewebe erfordert die Wirkung sowohl von Kollagenase-Enzymen als auch der neutralen Protease. Kollagenase wird durch vier Grammatom Calcium (Ca²⁺) pro Mol Enzym aktiviert. Es wird davon ausgegangen, dass das Kulturfiltrat mindestens 7 verschiedene Proteasen mit einer Molekülmasse von 68–130 kDa enthält (optimaler pH-Wert: 6,3–8,8). Das Enzym wird üblicherweise zum Verdau von Bindegewebskomponenten in Gewebeproben verwendet, um einzelne Zellen freizusetzen. Die Kollagenase-Behandlung kann dazu führen, dass einige Zellen absterben. Üblicherweise werden Konzentrationen zwischen 0,1 und 5 mg/mL für den Verdau verwendet. Die Dauer der Reaktion variiert zwischen 15 Minuten und mehreren Stunden und führt zu einer effizienten Zelldissoziation, ohne zu viele Zellen absterben zu lassen. Krebs-Ringer-Puffer mit Calcium und BSA wird bevorzugt und Zn²⁺ wird für die Aktivität benötigt.

Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.

Vorsicht

Bei Lieferung ist dieses Produkt für die Dauer von einem Jahr bei -20 °C haltbar. Es kommt innerhalb von 30 Tagen bei 37 °C, 50 °C und -20 °C zu keinem Verlust bei der FALGPA- oder Proteaseaktivität. Lösungen von RohKollagenase sind stabil, wenn sie schnell in Aliquoten (10 mg/mL) eingefroren und bei -20 °C tiefgekühlt gelagert werden. Weitere Gefrier-/Auftauzyklen schädigen die Lösung. Bei Lagerung auf Eis behält das Produkt seine gesamte Aktivität über 7 Stunden.

Einheitendefinition

Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.

Angaben zur Herstellung

Aus Typ IV (C5138) hergestellt. Eine Stammlösung kann durch das Auflösen von 0,05–0,1 mg/mL Kollagenase bei 37 °C in 50-mM-TES-Puffer, der 0,36 mM Calciumchlorid (TESCA) (mit einem pH-Wert von 7,4) enthält, hergestellt werden. Dieses Produkt enthält außerdem Clostripain, unspezifische neutrale Protease und tryptische Aktivitäten.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS07
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H315,H319,H334,H335
• P-Sätze: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves