BGALS-RO

β-Glucuronidase

from E. coli K 12

• EC-Nummer: 3.2.1.31 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.28

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Escherichia coli K12
• Qualitätsniveau: 100
• Form: solution
• Mol-Gew.: M_r ~220 kDa
• Verpackung: pkg of 1 mL (03707580001); pkg of 15 mL (03707601001); pkg of 5 mL (03707598001)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Lagerbedingungen: (Keep container tightly closed in a dry and well-ventilated place.)
• Parameter: 48 °C optimum reaction temp.
• Methode(n): activity assay: suitable
• Farbe: colorless
• Optimaler pH-Wert: 6.0-6.5
• Löslichkeit: water: soluble
• Eignung: suitable for enzyme test
• UniProt-Hinterlegungsnummer: ; P05804
• Anwendung(en): detection; sample preparation
• Lagertemp.: 2-8°C
• Angaben zum Gen: Escherichia coli ... uidA(946149)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Glucuronidase bei 25 °C oder 140 U/mg bei 37 °C, bei pH 7 mit 4-Nitrophenyl-β-D-Glucuronid als Substrat; 1 ml β-Glucuronidase enthält mindestens 140 U bei 37 °C.

Spezifität

Spaltet terminale Glucuronsäure die an Mono-, Oligo- oder Polysaccharide oder Phenol β-gebunden ist.

Anwendung

β-Glucuronidasen werden in Forschungslaboren und analytischen Laboren für die enzymatische Hydrolyse von Steroid-β-Glucuroniden eingesetzt. Anwendungsgebiete von β-Glucuronidase:

• Zur Hydrolyse von Steroidkonjugaten (Glucuronide) im Urin (pH 6,0–6,5)
• In Doping-Analysen
• Zur Detektion von Benzodiazepin in kleinen Dosen.
• Während der Probenvorbereitung zur Abspaltung von Glucuroniden vor GC-MS, HPLC, Immunassays oder anderen Analyseverfahren.

Es wird für die Hydrolyse von Enterolacton, Testosteron und Epitestosteron-Glucuronid im Plasma verwendet.

Biochem./physiol. Wirkung

Die Glucuronidierung ist ein Grundprinzip des Stoffwechsels. Viele Substanzen, die dem menschlichen Körper zugeführt werden, durchlaufen einen Stoffwechselprozess, der die Konjugation mit Glucuronsäure durch UDP-Glucuronosyltransferasen (UGTs) beinhaltet. β-Glucuronidase, auch als β-D-Glucuronosid-glucuronosohydrolase bekannt, katalysiert den Transfer einer Glucuronylgruppe zu zahlreichen biologisch und pharmakologisch aktiven endogenen und exogenen Molekülen. Glucuronid ist im Allgemeinen besser löslich, weniger giftig und vom menschlichen Körper leichter ausscheidbar als das ursprüngliche Molekül. Um diese Wirkstoffkonjugate in Körperflüssigkeiten wie Urin oder Plasma zu analysieren, muss das Glucuronid entkonjugiert werden. Die enzymatische Hydrolyse vor der Detektion ist ausschlaggebend, um bei der Analyse eine hohe Empfindlichkeit zu erzielen. Nach der Hydrolyse kann die Probe mittels Massenspektroskopie, Gaschromatographie, HPLC, Immunassay oder anderen analytischen Verfahren analysiert werden.

Leistungsmerkmale und Vorteile

β-Glucuronidase aus E. coli ist hochspezifisch für β-Glucuronide und ist in der Lage, Steroid-β-glucuronide sehr schnell zu hydrolysieren und viele andere Arten an Glucuroniden zu spalten, wie beispielsweise Benzodiazepin, Opioid und Cannabinoid. β-Glucuronidase wird zur enzymatischen Hydrolyse von Glucuroniden in biologischen Flüssigkeiten eingesetzt (vornehmlich Urin). Dopingmittel werden mit Glucuroniden konjugiert. Dies bedeutet, dass eine effektive Doping-Analyse oftmals von der enzymatischen Spaltung konjugierter Wirkstoffmoleküle durch β-Glucuronidase abhängig ist.

• Schnelle Analysen dank der hohen spezifischen Aktivität des Enzyms.
• Schnelles Screening auf Steroide, Benzodiazepine, Cannabinoide und Opioide.
• Zeitersparnis durch Entwicklung Ihrer Methode ohne Reinigung von Reaktionsprodukten oder Pufferung des Urins.

Einheitendefinition

Die internationale Einheit der β-Glucuronidaseaktivität ist die Enzymaktivität, welche die Freisetzung von 4-Nitrophenol aus 4-Nitrophenyl-β-D-glucuronid (4NPG) bei einer Temperatur von +25 °C und einem pH-Wert von 7,0 um 1 μM beschleunigt.
Früher wurde die Fishman-Einheit verwendet, die für die Freisetzung von Phenolphthalein von seinem Glucuronid (PPG) steht. Es ist nicht möglich, die relativen Aktivitäten verschiedener Zubereitungen für Steroid-β-Glucuronide durch einen Vergleich ihrer Aktivitäten in Bezug auf PPG zu messen. Viele Zubereitungen katalysieren die Hydrolyse von PPG, 4NPG oder der verschiedenen Steroid-β-Glucuronide in Urin nicht gleichermaßen. Die Wahl von 4NPG als Standardsubstrat basiert auf den folgenden Erwägungen:

• Die Michaelis-Konzentrationen der beiden Substrate sind ähnlich (K_M = 2 ×10^-4 M für 4 NPG und K_M = 6 ×10^-5 M für PPG), die entsprechenden Hydrolyseraten sind jedoch unterschiedlich:
• 4NPG wird etwa 5 x schneller hydrolysiert wie PPG;
• Bei PPG findet eine Hemmung durch überschüssiges Substrat statt; dies wird bei 4NPG nicht beobachtet.

Physikalische Form

Lösung in 50 % Glycerin, pH etwa 6,5
(15 ml in einer Flasche)

Sonstige Hinweise

Das β-Glucuronidase-Enzym aus E. coli ist praktisch frei von Sulfataseaktivität und zeichnet sich bei der Spaltung von Steroid- und Benzodiazepin-Konjugaten als besonders effizient aus.
Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Rechtliche Hinweise

Der Verkauf dieses Produkts erschöpft oder gewährt keine Rechte an Patenten Dritter, einschließlich Patenten von Unternehmen der F. Hoffmann - La Roche AG Unternehmensgruppe, insbesondere für die Verwendung modifizierter Antikörper, die durch die Verwendung des Produkts erzeugt werden.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): No data available
• Flammpunkt (°C): No data available